大豆多肽的分子量分布測定及體外消化實驗

　　現代生物代謝試驗發現，蛋白質并非必須通過消化道中的多種蛋白酶水解后，*終以氨基酸的形態才能被人體吸收，而是大部分在多肽(特別是二、三肽)形態時就能直接吸收。在用合成肽做的實驗中，發現二肽和三肽的吸收速度比同一組成的氨基酸快。短肽的吸收率比氨基酸大，比氨基酸更易、更快被機體吸收利用;短肽的低抗原性使得食后不會引起過敏反應;且短肽的滲透壓比氨基酸低，食后也不會引起痢疾等不良反應;短肽還具有良好的感官效應。

　　因此，大豆多肽是一種具有多種保健功能的功能性食品添加劑原料，市場前景十分廣闊。但是，肽類產品的功能性取決于其產品分子量分布和產品在體內經消化道后的穩定性，為驗證中食都慶(山東)生物技術有限公司生產大豆多肽(商品名稱：肽而康)產品質量，我們對該產品進行了分子量分布測定及體外消化實驗，目的是為肽而康產品為原料開發功能保健系列產品提供產品穩定性的理論依據。

　　試驗樣品為中食都慶(山東)生物技術有限公司生產的大豆多肽(商品名稱：肽而康)產品(干粉)。試劑為華美生物工程公司提供的消化酶(胃蛋白酶和胰蛋白酶)。緩沖液自制。緩沖液A，0.05mol/LHCl-KCl;緩沖液B，0.05mol/LKH2PO4-NaOH。

　　試驗儀器有英國Micromass公司毛細管液相色譜-四*桿-飛行

　　時間串聯質譜儀(CapLCQ-TOF2);沃特斯公司的Waters600HPLC，

　　凝膠色譜柱為WatersPak60;大連江申分離科學技術公司的反相色譜

　　柱CenturySILC8300A。

　　分子量分布的測定方法是將大豆多肽溶解于水，用HPLC進行凝膠過濾，收集各主要峰，用質譜法測定各組分的分子量。

　　多肽序列測定的方法是將大豆多肽溶解于水，直接用質譜法測定多肽的氨基酸序列。

　　體外消化包括胃蛋白酶消化和胰蛋白酶消化。稱取大豆多肽粉1g，加緩沖液A10ml，留取1ml作為對照;剩余的樣品中加入0.09g胃蛋白酶(0.19g胰蛋白酶)，37℃水浴3小時，然后進行高效液相色譜法(HPLC)分析。

　　HPLC分析：凝膠過濾色譜：流動相，水;流速0.5ml/min;上

　　樣量10～20μl。反相色譜：流動相A，0.1%TFA，流動相B，乙腈+

　　0.1%TFA;洗脫梯度，0～70%流動相B20分鐘，流速0.5ml/min。

　　本研究結果顯示，中食都慶(山東)生物技術有限公司生產的大豆多肽分子量均低于1000，且主要集中在245～700之間，即大多由2～6個氨基酸組成;經胃蛋白酶處理后，大豆多肽的凝膠色譜圖基本上沒有變化，說明該大豆多肽95%以上未被消化;經胰蛋白酶處理后的凝膠過濾色譜圖與處理前略有變化，但其變化率不超過5%，約90%的大豆肽未被消化，說明該產品具有良好的穩定性，在體內大部分將以多肽的形式被直接吸收。同時應用該大豆多肽產品開發功能性食品時，大豆多肽本身所具有的各項生理功能將不應發生改變。