粗甘油是生產生物柴油的主要副產品，常作為抗凍劑、增塑劑、洗滌劑、防腐劑和乳化劑的合成原料，也可應用于食品、化妝品和制藥等行業。從粗甘油中可以提取甾醇，植物甾醇在臨床醫學上具有降低膽固醇、消炎、退熱、抗潰瘍、抗腫瘤作用，在化妝品、動物生長劑、植物生長激素及化工和紡織等領域都有廣泛的應用。在生物柴油制備反應中，一般用甲醇作溶劑，將堿性催化劑溶解在甲醇中，所以生物柴油副產物粗甘油中含有未反應完全的甲醇，這也是粗甘油中甲醇的*主要來源。在由粗甘油制備精甘油的過程中，粗甘油中所含的甲醇會釋放到環境中，對人體健康造成損害如可使人體的中樞神經系統麻醉，并能使人體發生嚴重代謝性中毒;另外，甲醇溶入生產廢水中會對環境產生危害。因此建立原料粗甘油中甲醇的快速、準確檢測方法，對規范進口粗甘油的品質、保障相關生產企業工人的身體健康

　　及減少環境污染具有重要意義。

　　甲醇的檢測方法主要有分光光度法和氣相色譜法[6–7]。筆者建立了1，2-萘醌-4-磺酸鈉分光光度法測定進口粗甘油中甲醇的方法，在pH13.00的KCl–NaOH緩沖溶液中，甲醇作為催化劑，能夠催化氫氧根離子與1，2-萘醌-4-磺酸鈉反應，形成橙紅色的2-羥基-1，4-萘醌[8–9]，可用以直接測定甲醇含量。該法具有操作簡便、靈敏度高等特點。

　　1實驗部分

　　1.1主要儀器與試劑

　　往復式水浴恒溫振蕩器：HWT–10C型，天津恒奧公司;紫外可見分光光度計：Evolution300型，美國賽默飛世爾公司;分析天平：TP–214型，美國Denver公司;pH酸度計：UB–7型，美國Denver公司;超純水系統：SyneryUV型，美國Millipore公司;甲醇標準溶液：純度不低于99.9%，美國Chemservice公司;1，2-萘醌-4-磺酸鈉：純度不低于99.7%，日本TokyoKasei公司;氯化鉀：分析純，北京化工廠;氫氧化鈉：分析純，廣州化學試劑廠;1，2-萘醌-4-磺酸鈉溶液：0.005mol/L，準確稱取0.1301g1，2-萘醌-4-磺酸鈉于25mL燒杯中，加適量蒸餾水超聲溶解后轉移到100mL容量瓶中，定容至刻度，現配現用;氫氧化鈉–氯化鉀緩沖溶液：稱取1.32g氫氧化鈉和0.75g氯化鉀于50mL燒杯中，充分溶解后，轉移到250mL容量瓶中，定容至刻度，并用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調節至pH值13.00;甲醇標準儲備溶液：10g/100mL，準確稱取10.0235g甲醇標準溶液于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，4℃冰箱中保存，實驗時取適量上述溶液稀釋至所需濃度。

　　1.2實驗方法

　　(1)標準工作曲線繪制。

　　利用甲醇標準儲備溶液配制濃度分別為0，0.04，0.20，0.40，0.80，2.0g/L系列甲醇標準溶液，移取上述系列標準溶液分別于25mL比色管中，依次加入5.0mLKCl–NaOH緩沖溶液、6mL5.0×10–3mol/L1，2-萘醌-4-磺酸鈉溶液，用水稀釋至標線，搖勻，常溫下放置30min后，以不加甲醇的試劑空白為參比，于454nm處測其吸光度。

　　(2)樣品處理及測定。

　　準確稱取粗甘油樣品5.0～10.0g(根據粗甘油中甲醇含量而定)于蒸餾瓶中，加入100mL超純水和2g氯化鈉，在沸水浴中蒸餾，收集蒸餾液于50mL容量瓶中作為樣液，冷卻至室溫，用水稀釋至標線。取上述樣液10mL于25mL比色管中，依次加入5.0mLKCl–NaOH緩沖溶液，6mL5.0×10–3mol/L1，2-萘醌-4-磺酸鈉溶液，用水稀釋至標線，搖勻，常溫下放置30min后，以試劑空白為參比，于454nm處測其吸光度，根據吸光度的大小，利用標準工作曲線求出待測液中甲醇的含量，并根據取樣量及稀釋倍數計算粗甘油中甲醇的含量。

　　2結果與討論

　　2.1吸收曲線

　　準確移取1.25mL甲醇標準儲備液于25mL比色管中，依次加入NaOH–KCl緩沖溶液5.0mL，0.005mol/L1，2-萘醌-4-磺酸鈉溶液6mL，用水稀釋至25mL，搖勻，室溫下放置30min。以試劑空白為參比，在330～700nm波長之間進行全掃描，以確定反應產物的*大吸收波長，結果見圖1。由圖1可見，*大吸收波長位于454nm，因此選擇*佳分

　　析波長為454nm

　　2.2溶液的pH值

　　溶液pH值對甲醇催化反應形成產物的影響見圖2。

　　由圖2可見，當pH值為0～12.00時，溶液的吸光度很小。根據文獻[10]，甲醇的電離常數pKa為15.5，pH值較高時，在強堿性溶液中的甲醇能部分電離形成CH3O–，它可以催化1，2-萘醌-4-磺酸鈉和氫氧根離子發生作用，形成對可見光有較強吸收的2-羥基-1，4-萘醌，從而使吸光度增大。在較高的酸度條件下，甲醇分子難以電離出CH3O–，大大降低了它催化1，2-萘醌-4-磺酸鈉和氫氧根離子發生作用的能力。當pH值為13.00～14.00時，甲醇能部分電離形成CH3O–，加快催化1，2-萘醌-4-磺酸鈉和氫氧根離子發生作用，形成2-羥基-1，4-萘醌，從而使吸光度增大，因此選擇溶液的pH值為13.00。

　　2.3顯色劑和緩沖溶液的用量

　　選擇一定濃度的甲醇標準溶液，以對應實際空白為參比，分別考察了5.0×10–3mol/L1，2-萘醌-4-磺酸鈉溶液用量為4.0～8.0mL、緩沖溶液用量為2～6mL時對測定甲醇的影響。結果顯示，當顯色劑的用量分別為4.0，5.0，6.0，7.0，8.0mL時，吸光度分別為0.234，0.295，0.325，0.327，0.321;當緩沖溶液用量分別為2，3，4，5，6mL時，吸光度分別為0.085，0.148，0.286，0.319，0.317。由此可見，隨著1，2-萘醌-4-磺酸鈉溶液和緩沖溶液加入量的增加，吸光度逐漸增大。當1，2-萘醌-4-磺酸鈉溶液和緩沖溶液的用量分別為6.0，1.5mL時，吸光度達到*大且比較穩定。因此選擇顯色劑和緩沖溶液用量分別為6.0mL和5mL。

　　2.4穩定時間

　　由于1，2-萘醌-4-磺酸鈉在甲醇的催化下與OH–反應生成2-羥基-1，4-萘醌需要一定時間，所以反應產物的吸光度穩定性與時間有關。選擇合適的甲醇標準溶液濃度按照1.2(2)進行試驗，考察產物的穩定時間與吸光度之的關系。實驗結果表明，從反應開始，隨著放置時間的增加，反應體系的吸光度不斷增大，當放置時間達到30min時吸光度達到*大且趨于穩定，本實驗選擇穩定時間為30min。

　　2.5干擾試驗

　　用ICP–AES檢測多批從不同國家進口的粗甘油中金屬的含量，發現基本以Na+和K+為主，Na+的濃度在2000～8000mg/L之間，K+的濃度在4000～16000mg/L之間;另外還有少量的Fe3+，Mg2+，Cu2+和Ca2+等金屬離子。考察了進口粗甘油中存在的常見離子對甲醇測定的干擾，控制測試結果的相對誤差在±5%以內，當甲醇的濃度為1.0mg/mL時，800mg/L的Na+，K+，NO3–，C1–，SO42–;50mg/L的Mg2+;16mg/L的Cu2+不影響測定結果。實驗采用蒸餾法將粗甘油中甲醇蒸餾出來，甲醇與粗甘油中的雜質能有效分離，所以粗甘油中的金屬離子及其它雜質基本不干擾甲醇的測定。

　　2.6標準曲線、檢出限和精密度

　　分別準確移取甲醇標準儲備液0.1，0.5，1.0，2.0，5.0mL于25mL比色管中，依次加入NaOH–KCl緩沖溶液5mL，0.005mol/L1，2-萘醌-4-磺酸鈉溶液6.0mL，用水稀釋至25mL，搖勻，室溫下放置30min。以試劑空白為參比，在454nm下測其吸光度，每個濃度平行測定5次。以吸光度為縱坐標，甲醇的濃度為橫坐標繪制標準工作曲線。實驗結果表明，甲醇濃度c在0.040～2.0g/L范圍內與吸光度A呈良好的線性關系，線性回歸方程為A=0.0526+0.5021c，r=0.9993。平行測定11份空白溶液，計算測定結果的標準偏差，按10倍標準偏差計算，再乘以樣品的稀釋倍數，得到方法的檢出限為0.025mg/mL。連續測定甲醇含量不同的3份粗甘油樣品各7次，測定結果的相對標準偏差為2.8%～4.6%。

　　2.7樣品測定及回收率試驗

　　分別取不同國家進口的粗甘油樣品，精密稱定后置于蒸餾瓶中，精密加入不同量的甲醇，按照選定實驗條件測定甲醇含量并進行加標回收試驗，結果見表1。由表1可知，回收率為93.4%～104.5%。