橘紅丸(大蜜丸)主要由化橘紅、陳皮、半夏(制)、茯苓、甘草等15味藥組成，具有清肺，化痰，止咳之功效，臨床主要用于痰熱咳嗽，痰多，色黃黏稠，胸悶口干等。橘紅丸(大蜜丸)中煉蜜作為黏合劑約占總量的50%，因此蜂蜜的質量對該藥物療效有重要作用。蜂蜜的基本組成是以葡萄糖和果糖為主的各種糖類，其中果糖和葡萄糖含量一般占蜂蜜的60%以上，另外還含有微量元素、酶類等成分。現在市場上蜂蜜存在摻偽現象，主要替代品有轉化糖漿、麥芽糖漿、果葡糖漿等[1，2]。蜂蜜中還原糖含量檢測方法主要有高效液相示差法、高效液相熒光法、化學法等。為更好監測蜂蜜在橘紅丸中的使用情況，筆者建立了HPLC–ELSD法測定果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖的含量測定方法，該法靈敏度高、檢出限低，提取分離簡單，能更好地控制橘紅丸(大蜜丸)的質量。

　　1. 實驗部分

　　1.1主要儀器與試劑

　　高效液相色譜儀：Agillent1200型，配ELSD檢測器，美國Agillent科技公司;

　　果糖(100057–200601)、葡萄糖(110833–200503)、蔗糖(111507–200001)、麥芽糖(100287–200701)對照品：中國食品藥品檢定研究院;乙腈、乙醇：色譜純;橘紅丸、蜂蜜樣品：來源于2011年度全國評價性抽驗橘紅丸系列品種中的大蜜丸及各生產廠家提供的蜂蜜原料;實驗用水為純化水。

　　1.2色譜條件

　　色譜柱：prevailcarbohydrateES色譜柱;流動相：乙腈–水(體積比77∶23);檢測器：蒸發光散射檢測器(ELSD);漂移管溫度：70℃;柱溫：室溫;進樣量：5μL。理論板數按果糖色譜峰計算，不低于5000。在上述條件下，對照品溶液及供試品溶液色譜圖分別見圖1～圖4。

　　1.3溶液制備

　　1.3.1橘紅丸供試品溶液

　　稱取橘紅丸(大蜜丸)樣品6g，精密稱定，精密加水60mL，溶散，超聲處理30min使其溶解，過濾，取續濾液1mL，置于10mL量瓶中，加水至標線，過濾。

　　1.3.2蜂蜜供試品溶液

　　稱取蜂蜜1g，精密稱定，置于10mL量容瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取0.5mL，置于10mL量瓶中，加水稀釋至標線。

　　1.3.3空白陰性溶液

　　按照處方比例，計算相當于6g橘紅丸(大蜜丸)所含藥材的量，分別取對照藥材化橘紅0.33g，陳皮、茯苓、苦杏仁、瓜蔞皮、浙貝母、地黃、麥冬、石膏各0.22g，半夏(制)、炒紫蘇子、紫菀各0.167g，甘草、款冬花各0.11g混合均勻，按藥粉與煉蜜以1∶1的比例計算，取混合藥粉1.5g，精密加水30mL，超聲處理30min，過濾，取續濾液1mL，置

　　于10mL量瓶中，加水稀釋至標線，過濾，作為空白陰性對照溶液。

　　2. 結果與討論

　　2.1提取溶劑的選擇

　　試驗比較了30%，50%，70%乙醇及水作為供試品提取溶劑，結果表明以水為溶劑對4種糖提取效果*好，因此選擇水為*終提取溶劑。

　　2.2工作曲線及檢出限

　　精密稱取對照品果糖10.36mg，D-無水葡萄糖10.73mg、蔗糖10.78mg、麥芽糖11.17mg，置于10mL量瓶中，加水溶解并稀釋至標線，搖勻。分別進樣1，2，3，5，10，12，15μL進行測定。以待測組分色譜峰面積的自然對數值為縱坐標，以進樣濃度為橫坐標進行線性回歸(n=7)，果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖的線性回歸方程見表1。精密量取對照品混合溶液1mL，置于100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，進行測定。設色譜儀*低響應值為S=3N(N為儀器噪音水平)，檢出限按D=S/b(b為標準曲線方程斜率)計算，結果見表1。

　　2.3儀器精密度試驗

　　精密配制果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖的濃度為2.3695，2.5602，0.2724，0.6027mg/mL的混合對照品溶液，平行測定5次，結果見表2。結果表明，儀器精密度較好。

　　2.4重復性試驗

　　稱取橘紅丸(大蜜丸)樣品6g，精密稱定，按“1.3.1”供試品溶液的制備方法分別制得6份供試品溶液，在選擇的色譜條件下測定，結果見表3。由表3結果可知，被測樣品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量5次測定結果的相對標準偏差為0.28%～0.58%，說明重復性較好。

　　2.5加標回收試驗

　　稱取已測知含量的橘紅丸約3g，精密稱定后置

　　于錐形瓶中，精密量取對照品溶液10mL(果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖的濃度分別為23.695，25.602，2.723，6.027mg/mL)，然后精密加水50mL，溶散，超聲處理30min使其溶解，過濾，取續濾液1mL，置于10mL量瓶中，加水至標線，過濾，按色譜條件測定，結果見表4。

　　2.6空白陰性試驗

　　取1.3.3中空白陰性供試品溶液，在選擇的色譜條件下進行測定，果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖的含量分別為15.6，11.5，5.8，0mg/g，說明在橘紅丸處方中除蜂蜜以外其它藥味中含有一定量的果糖、蔗糖和麥芽糖，但含量較低。

　　2.7樣品測定

　　采用本方法，對114批橘紅丸(大蜜丸)、21批蜂蜜樣品進行了測定，測定結果分別見表5、表6。國家蜂蜜標準(GB14963–2011)規定，蜂蜜中果糖和葡萄糖含量(總量)不低于60%;蔗糖不得高于10%或5%。4種糖的測定結果表明，114批橘紅丸(大蜜丸)中果糖和葡萄糖的含量(總量)、蔗糖及麥芽糖的含量差別明顯，考慮到煉蜜過程可能會

　　導致果糖含量降低的因素[3]，果糖和葡萄糖總量大于250mg/g的樣品可認為是正常樣品。114批橘紅丸樣品中果糖和葡萄糖總量低于此限值的共有50批，占43.9%;蔗糖含量測定基本正常;麥芽糖含量范圍為0～25%，說明個別批次樣品疑為摻假或使用麥芽糖漿。21批蜂蜜供試品中，葡萄糖與果糖總量均高于60%，蔗糖、麥芽糖含量檢測均未見異常，說明蜂蜜質量狀況較好[4]。