硫代葡萄糖苷( 簡稱硫苷) 是廣泛存在于十字花科植物中的含硫次級代謝產物，主要分布于植物的根、莖和葉中。當植物細胞受到破壞( 如擠壓、蟲咬等) 后，硫苷與植物內生的黑芥子酶接觸，降解產生異硫氰酸酯、惡唑烷酮和硫氰酸酯等化合物[1]，其中異硫氰酸酯具有良好的生物活性，而且對人畜無害。因此硫苷及其降解產物的研究引起了科學工作者的濃厚興趣。根據側鏈R 基團的不同，目前已發現約120 種硫苷，其中有多種具有抗癌、抗腫瘤、殺菌和殺蟲活性的異硫氰酸酯，如吳華等[2]比較幾種異硫氰酸酯的殺線蟲活性，發現烯丙基和丙烯?；惲蚯杷狨ゾ哂辛己玫臍⒕€蟲活性。大量研究表明甲硫基己基異硫氰酸酯等具有良好的抗腫瘤活性，是非常具有潛力的抗癌藥物[3–6]。硫苷的檢測方法主要是傳統的化學方法和現代的儀器分析手段。化學方法耗時、誤差大、操作繁瑣，只能測定硫苷總量。液相色譜法具有很高的分離效率，但對于硫苷單體鑒別需要對照品，無法滿足快速鑒別硫苷的需要。筆者采用超高效液相色譜–離子阱– 飛行時間質譜聯用技術，既能高效分離硫苷，又能準確、快速鑒別硫苷。對于硫苷及降解產物的研究具有重要意義，同時又能夠提高工作效率。

　　1實驗部分

　　1.1主要儀器與試劑

　　超高效液相色譜– 離子阱– 飛行時間質譜儀：LCMS–IT–TOF 型，日本島津公司;數顯恒溫水浴鍋：HH–6 型，常州澳華儀器有限公司;真空干燥箱：VD23 型，德國BINDER 公司;電子天平：AUY220 型，日本島津公司;超聲波清洗器：KS–120EI 型，寧波海曙科生超聲設備有限公司;旋轉蒸發儀：R–216 型，瑞士BUCHI 公司;臺式高速離心機：H–1650 型，長沙湘儀離心機儀器有限公司;研磨機：A11 基本型，德國IKA 公司;白芥種子：產地為湖北武漢;正己烷、氯仿、乙酸銨、甲酸：分析純，廣州化學試劑廠;甲醇：色譜純，美國Fisher 公司;實驗用水為美國Pall 公司Purelab Ultra 超純水系統制備的超純水，電阻率為18.2 MΩ · cm。

　　1.2硫代葡萄糖苷提取[7–8]

　　白芥種子在105℃干燥3 h，以滅活黑芥子酶保護硫苷。干燥種子經粉碎后，過420 μm 篩。稱取粗粉約50 g 于錐形瓶中，依次用正己烷50 mL，氯仿50 mL 各3 次除脂。殘渣經真空干燥，用300 mL沸騰的70% 甲醇水溶液浸泡，超聲提取30 min，連續2 次，合并提取液，靜置至室溫。提取液經離心分離，將清液真空下濃縮至原體積的20%。取1 mL濃縮液經石墨化碳脫色，濾液供超高效液相色譜–串聯質譜分析。

　　1.3流動相配制

　　用電子天平準確稱量乙酸銨0.385 g，置于1 L量瓶中，加入1 mL 甲酸，用水溶解定容后，經0.22μm 微膜過濾，超聲波脫氣后使用。

　　1.4液質聯用分析條件

　　(1)UPLC 條件

　　ODS C18 柱(100 mm×2.1 mm，3.5 μm，日本島津公司) ;柱溫：30℃;流動相A ：5 mmol/L 乙酸銨–1‰甲酸溶液;流動相B ：甲醇;流動相流速：0.2 mL/min ;進樣體積：20 μL ;梯度洗脫：0～3min，98% A ;3～25 min，98%～20% A ;25～30 min，20%～20 % A ;30～35 min，20%～98% A。

　　(2)MS 條件

　　ESI 負離子模式;電壓：–3.5 kV ;霧化氣：N2，流量為1.5 L/min ;干燥氣壓力：100 kPa ;碰撞氣：Ar ;檢測器電壓：1.7 kV ;Heat Block 溫度：200℃;CDL 溫度：200℃;一級質譜掃描范圍：m/z300～700 ;母離子掃描范圍：m/z 315～650 ;二級質譜掃描范圍：m/z 50～700 ;離子累積時間：10 ms ;CID 碰撞能量：**** ;碰撞氣能量：****。

　　2結果與討論

　　2.1分析條件選擇

　　硫苷在水溶液中是親水性陰離子化合物，在反相色譜柱中，保留時間短。優化實驗發現，在ODS–C18 柱上采用流動相A(5 mmol/L 的乙酸銨+0.1%甲酸) 和流動相B( 甲醇) 能夠很好分離，并且有很好的質譜響應。質譜Heat Block 和CDL 溫度采用200℃，溫度過高會造成硫苷裂解，過低則影響離子化和脫溶劑化效果。為獲得比較豐富的二級離子碎片信息，CID 碰撞能量和碰撞氣能量均采用****。

　　2.2分析結果

　　按照1.4 分析條件檢測白芥種子提取液，獲取硫苷提取離子流色譜圖及其一、二級質譜圖( 見圖1～圖11)。根據裂解機理，并參考文獻[9–12]，共鑒定出5 種硫苷，結果見表1。

　　2.3質譜碎片離子裂解機理

　　二級質譜特征離子，對于鑒別硫苷具有重要意義。在MS2 中，母離子先后失去SO3(80 Da) 和C6H10O5(162 Da) 后產生242 Da 中性分子丟失，氫重排后出現相對應的R—C(SH)=N—O— 離子。另一裂解途徑是硫苷上的氫發生重排后，失去C6H11O5(163 Da) 和C6H12O5S(196 Da) 中性碎片。與此同時，二級質譜中還能觀察到m/z 195，241，259，275，291 的特征離子，這些離子是由于硫與相鄰碳原子發生斷裂，并伴有氫重排形成的。硫代葡萄糖苷負離子模式下主要特征二級碎片離子裂解機理見圖12[13–14]。