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液相色譜法測(cè)定牛奶中的香蘭素與乙基香蘭素

作者:宋檢 時(shí)間:2022-10-17 來(lái)源:互聯(lián)網(wǎng)

香蘭素與乙基香蘭素是人工合成的香精,可增強(qiáng)食品口感,使其清香宜人[1],是食品添加劑行業(yè)中不可缺少的重要原料,可直接應(yīng)用于化妝品、香皂、香煙、糕點(diǎn)、糖果、餅干、奶粉以及烘烤食品中[2]。但大劑量使用香蘭素可以導(dǎo)致頭痛、惡心、嘔吐、呼吸困難,甚至損傷肝、腎,對(duì)人體有較大危害。常見(jiàn)香蘭素與乙基香蘭素的分析方法有氣相色譜法[3–4]、分光光度法[5–6]、高效液相色譜(HPLC)法[7]、液相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用[8]及其它方法[9–11]。筆者采用HPLC法同時(shí)測(cè)定香蘭素與乙基香蘭素,通過(guò)對(duì)牛奶樣品的簡(jiǎn)單處理和流動(dòng)相的優(yōu)化,使得方法操作簡(jiǎn)單,精密度高,重復(fù)性好,可用于牛奶中香蘭素與乙基香蘭素的日常檢測(cè)。

  1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

  分別取香蘭素與乙基香蘭素標(biāo)準(zhǔn)樣品各1mL,以甲醇溶解并定容于10mL容量瓶中,配制成100mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。精密移取0.5mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,以流動(dòng)相溶解并定容于100mL容量瓶中,配制成0.5mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,過(guò)濾,備用。

  1.3樣品溶液的配制

  稱取牛奶樣品5g,以25mL50℃熱水溶解,超聲10min,用5mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)至pH1.7,置5min,再用2mol/LNaOH溶液調(diào)節(jié)至pH4.5,此時(shí)溶液變?yōu)閼覞嵋海瑢⒋藨覞嵋恨D(zhuǎn)移至50mL容量瓶中,用純水定容至標(biāo)線后倒入漏斗,用快速定性濾紙過(guò)濾,棄去初濾液,收集中間濾液,充分搖勻,過(guò)濾,備用。

  1.4色譜條件

  流動(dòng)相:甲醇–0.01mol/L磷酸溶液(體積比為30∶70);流速:1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):276nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:20μL。

  2結(jié)果與討論

  2.1流動(dòng)相組成

  考察了乙腈–乙酸、乙腈–磷酸二氫鉀、甲醇–磷酸等流動(dòng)相,雖然乙腈的洗脫能力強(qiáng)于甲醇,但其毒性較大,而且香蘭素與乙腈香蘭素的色譜峰形、分離度均不符合分析要求;而用甲醇–磷酸體系可以得到標(biāo)準(zhǔn)對(duì)稱的色譜峰形,因此選擇甲醇–磷酸體系作為流動(dòng)相。

  2.2前處理方法

  牛奶中的蛋白質(zhì)含量較高,因此樣品要先用50℃熱水超聲提取,再經(jīng)酸沉淀蛋白后進(jìn)行測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:本方法加標(biāo)回收率大于98%,且操作簡(jiǎn)單,可以滿足牛奶中香蘭素與乙基香蘭素的檢測(cè)要求。

  2.3色譜圖

  在1.4色譜條件下香蘭素與乙基香蘭素標(biāo)準(zhǔn)溶液及牛奶樣品的高效液相色譜圖見(jiàn)圖1,由圖1可知,香蘭素與乙基香蘭素分離良好、峰形對(duì)稱,符合分析要求。

  2.4精密度試驗(yàn)

  精密吸取香蘭素、乙基香蘭素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL,按照1.4色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,分別測(cè)定香蘭素和乙基香蘭素的色譜峰面積,測(cè)定結(jié)果列于表1。由表1可知,香蘭素與乙基香蘭素色譜峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.09%,0.89%,表明儀器的精密度良好。

  2.5線性關(guān)系、檢出限

  分別精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.05,0.1,0.2,0.5,1.0mL于10mL容量瓶中,以流動(dòng)相稀釋至標(biāo)線,搖勻,制得不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別精密吸取20μL,按1.4色譜條件進(jìn)樣測(cè)定色譜峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度X(μg/mL)為橫坐標(biāo),峰面積值Y為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,在0.5~10μg/mL的進(jìn)樣范圍內(nèi),香蘭素的線性方程為Y=6.656×10–6X+0.193,r2=0.9997;乙基香蘭素的線性方程為Y=8.022×10–6X+0.194,r2=0.9997,表明二者濃度與色譜峰面積線性關(guān)系良好。將混合標(biāo)準(zhǔn)溶液以不同倍數(shù)稀釋后進(jìn)行測(cè)定,以峰高為基線噪音3倍時(shí)的質(zhì)量濃度為檢出限,測(cè)得香蘭素和乙基香蘭素的檢出限分別為5.68μg/L和12.8μg/L。

  2.6重復(fù)性試驗(yàn)

  精密稱取同一牛奶樣品6份,照上述樣品制備方法制備,按1.4色譜條件進(jìn)樣測(cè)定香蘭素與乙基香蘭素的含量,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知,牛奶樣品中香蘭素與乙基香蘭素平均含量為2.014mg/kg和1.990mg/kg,測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.35%,1.57%。表明方法測(cè)量重復(fù)性良好。

  2.7加標(biāo)回收試驗(yàn)

  取牛奶樣品9份,每份為5g,每3份為一組,每組分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液4,5,6mL,按照1.3樣品溶液的配制方法進(jìn)行提取和定容后,按1.4色譜條件測(cè)定,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知,實(shí)驗(yàn)所得香蘭素、乙基香蘭素平均加標(biāo)回收率為99.8%,98.4%;測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.06%,2.31%。

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