苯并(α)芘是一種強致癌化合物，被國際癌癥研究中心列為2A類致癌物，會對人體健康造成潛在威脅。人體中的苯并(α)芘從食物中的攝入量高于從空氣和飲用水中的攝入量，而從食用油中的攝入量占食物中攝入量的1/3[1]。GB2716–2005[2]規定，食用植物油類產品中苯并(α)芘的安全限量為不超過10μg/kg。目前，苯并(α)芘的檢測方法有熒光分光光度法[3]、液相色譜–紫外檢測器法[4]、液相色譜–熒光檢測器法[5–7]等。測量不確定度在實驗室間比對、測量臨界值的判斷、方法的確認及檢測工作國際化等方面具有重要意義。根據JJF1059–1999[8]的要求，筆者對高效液相色譜法測定植物油中苯并(α)芘含量的測量結果進行了不確定度評定。

　　1實驗部分

　　1.1主要儀器與試劑

　　高效液相色譜儀：1100型，配熒光檢測器，美國安捷倫公司;中性氧化鋁小柱;乙腈、甲苯、四氫呋喃：均為色譜純。

　　1.2色譜條件

　　色譜柱：多環芳烴分析柱(4.6mm×250mm，5μm);流動相：乙腈–水(體積比為88∶12)，流速為1.0mL/min;熒光檢測器：發射波長為406nm，

　　激發波長為384nm。

　　1.3溶液配制

　　苯并(α)芘標準溶液：精確稱取12.5mg苯并(α)芘標準樣品于25mL容量瓶中，用甲苯溶解，定容。分別用甲苯稀釋成系列濃度的標準溶液，用以繪制

　　標準工作曲線。樣品溶液：稱取約0.4g植物油樣品，用2mL石油醚溶解稀釋。將稀釋液過層析柱，向層析柱中加入20mL石油醚，洗脫，洗脫速度為1mL/min，收集洗脫液。將洗脫液在65℃的水浴中旋轉蒸發至1mL，轉移至樣品瓶中，于35℃下氮吹至干，注入100μL乙腈四氫呋喃混合溶液，渦旋溶解，待測。

　　2數學模型

　　樣品中苯并(α)芘含量測定采用外標法定量，結果計算公式為：

　　3不確定度的主要來源

　　3.1利用標準曲線得出試樣中苯并(α)芘的濃度引入的不確定度包括標準樣品引入的不確定度，標準工作液配制時玻璃儀器校準引入的不確定度、溫度變化引入的不確定度及標準曲線擬合引入的不確定度。

　　3.2樣品稱量引入的不確定度

　　由天平的*大允許誤差引起。

　　3.3體積引入的不確定度

　　由定容體積和進樣體積的不確定度組成。

　　3.4樣品處理過程引入的不確定度

　　測試樣品的制備過程非常復雜，需經過均質、溶液轉移、過濾、固相萃取等步驟，每一步操作都會引入不確定度，要采用檢測方法確認的有關數據，如回收率對制樣過程引入的不確定度進行評定。

　　4不確定度分量的評定

　　4.1由標準曲線求得試樣中苯并(α)芘的濃度引入的相對標準不確定度

　　4.1.1標準樣品純度引入的不確定度在苯并(α)芘標準樣品證書上查得其純度為(99.6±0.5)%。在95%置信區間內，包含因子k=2。由苯并(α)芘純度引入的相對標準不確定度：u1=0.5%/2=2.5×10–3

　　4.1.2標準物質稱量引入的不確定度

　　用精確至0.1mg的電子分析天平稱取苯并(α)芘標準樣品，稱量過程所引入的不確定度來自天平校準。天平校準的允許誤差*值為±0.1mg，按正態分布，容量因子k=2，稱樣量為12.5mg，則稱量標準樣品時天平引入的相對標準不確定度：

　　4.1.3玻璃量具引入的不確定度

　　根據JJG196–2006[9]，1mLA級分度吸量管允許*大誤差為±0.008mL，按均勻分布，k=3，則1mLA級分度吸量管引入的相對標準不確定度[10]：

　　同理，查JJG196–2006得，5mLA級分度吸量管允許*大誤差為±0.025mL;10，25，100mLA級單標容量瓶的允許誤差分別為±0.020，±0.030，±0.10mL。以上各量按均勻分布，k=3，則各量引入的相對標準不確定度：

　　將以上數據合成，得玻璃量具引入的相對標準不確定度：

　　4.1.4溫度變化引入的不確定度

　　實驗室的溫度波動范圍一般為±3℃，水體積膨脹系數為2.1×10–4/℃，玻璃的膨脹系數為9.75×10–6/℃(可忽略不計)。計算標準不確定度時按照均勻分布，k=3，各吸量管及容量瓶因溫度變化引入的不確定度列于表1。

　　將表1中數據合成，得溫度變化引入的相對標準不確定度：

　　4.1.5標準曲線擬合引入的不確定度

　　用液相色譜儀分別測定5種濃度的苯并(α)芘標準溶液，每種濃度測3次，得到相應的峰面積A，測定結果見表2。實驗數據用*小二乘法進行擬合，得到直線方程y=a+bx，a為截距，b為斜率。

　　由表2數據計算得：b=1095.559，a=0.739。標準曲線的標準偏差s=0.7317。

　　對被測樣品測量兩次，由下式[8]計算得苯并(α)芘濃度x0的標準偏差估計值s(x0)=5.037×10–5：

　　由標準曲線計算得被測樣品濃度的相對標準不確定度：

　　則由標準曲線計算得試樣中苯并(α)芘的濃度引入的相對標準不確定度：

　　4.2樣品稱量引入的不確定度

　　同4.1.2，用感量為0.1mg的電子分析天平稱取0.4g植物油樣品，稱量引入的相對標準不確定度：

　　4.3樣品處理液定容引入的不確定度

　　根據JJG196–2006，0.1mLA級分度吸量管允許*大誤差為±0.002mL，按均勻分布，k=3，則0.1mLA級分度吸量管的相對標準不確定度：

　　如表1，溫度變化引入的相對標準不確定度：u17=3.64×10–4，則樣品處理液定容引入的相對標準

　　不確定度:

　　。

　　4.4試樣均勻性和處理操作過程引入的不確定度

　　測量重復性主要受實驗人員在樣品處理過程中的操作一致性、樣品均勻性和儀器性能的影響，該不確定度屬A類評定，利用添加2.20μg/kg水平10次樣品回收率測定結果(見表3)進行計算，標準不確定度采用平均值的標準偏差進行評定。樣品處理過程引入的不確定度為：

　　4.5合成標準不確定度

　　由上述各相對標準不確定度合成植物油中苯并(α)芘含量測定的相對標準不確定度為：

　　4.6擴展標準不確定度

　　根據測量不確定度評定指南對一般實驗室的要求[8]，在置信概率P=95%時，取k=2，植物油中苯并(α)芘含量測定結果的相對擴展不確定度為：U95,rel=kurel(X)=2×0.0126=2.5%由實驗數據的平均值計算得該植物油中苯并

　　(α)芘含量的*佳估計值：X=2.06μg/kg，故擴展不確定度：U95=XU95,rel=0.05μg/kg。

　　4.7測量結果報告

　　按照GB/T22509–2008檢測方法，當取樣量為0.40g時，植物油中苯并(α)芘的含量測定結果為(2.06±0.05)μg/kg，k=2。