陜南地處秦巴山區之間，水資源豐富，地理條件復雜，具有生產和發展中藥材得天獨厚的條件和豐富的資源，素有“生物基因庫”和“天然藥庫”之稱，是全國中藥材的傳統產地和集散地之一。中藥材在生長和儲存過程中容易受到病蟲害的影響，大多使用化學農藥進行防治，因此在中藥材中會存在農藥殘留問題[1–3]。中藥材的質量評價不僅包括有效成分，還包括一些外源性的污染物[4]，如農藥、重金屬、微生物等，其中農藥殘留問題引起世界各國的高度重視。

　　目前有關中藥材中農藥殘留分析的方法主要有氣相色譜法(GC)[4]、氣相色譜–質譜法(GC–MS)[5]、高效液相色譜法(HPLC)[6]、高效液相色譜法–質譜法(HPLC–MS)[7–8]等。氣相色譜–質譜聯用儀由于具有較高的靈敏度和較強的定性能力，成為目前農藥多殘留同時檢測的主流分析儀器，可以實現數百種農藥同時檢測[9–10]。中藥材基質復雜，在進行農藥殘留分析通常需要對樣品提取液進行凈化。農藥殘留的凈化技術主要有液–液萃取;固相萃取和凝膠滲透色譜(GPC)等方法。凝膠滲透色譜(GPC)作為一種新型的樣品凈化技術，已經成功地應用于各類樣品中農藥的多殘留分析，但應用于中藥材中農藥多殘留的分析較少。筆者采用GPC或GPC–SPE凈化樣品，氣相色譜–質譜法

　　(GC–MS)作為檢測儀器，建立了GC–MS同時測定陜南中藥材中81種農藥殘留的檢測方法。

　　1實驗部分

　　1.1主要儀器與試劑

　　氣相色譜–質譜儀：7890A/5975C型，美國Agilent公司;凝膠滲透色譜凈化系統：GPCultra10836型，德國LCTech公司;超純水制備儀：Mill-Q型，美國Millipore公司;乙二胺-N-丙基甲硅烷(PSA)固相萃取小柱：300mg/3mL，使用前用5mL乙腈活化并保持柱體濕潤，美國Agilent公司;乙腈、環己烷、乙酸乙酯、丙酮和正己烷：色譜純，美國TEDIA公司;氯化鈉和無水硫酸鈉：分析純，美國Sigma公司;81種農藥標準品：包括有機磷類、有機氯類、氨基甲酸酯類農藥，純度不小于97℅，美國Sigma公司;中藥材均購自陜南地區。

　　1.2標準溶液配制

　　準確稱取適量各種農藥標準品，用含0.1%乙酸的乙腈溶解，配制成濃度為1000μg/mL的單標儲備液，貯存于4℃冰箱中備用。分別準確移取上述81種農藥化合物單標儲備液500μL于50mL容量瓶中，用含0.1%乙酸的乙腈定容，配制成濃度均為10μg/mL的混合標準溶液。用含0.1%乙酸的乙腈逐級稀釋得到1.0，0.1，0.05，0.02，0.01μg/mL的系列混合標準工作液，貯存于4℃冰箱中備用。

　　1.3樣品前處理

　　1.3.1樣品提取

　　取中藥材樣品自然陰干，用高速粉碎機粉碎，過250μm(60目)篩，稱取6g(精確至0.01g)樣品至50mL聚丙烯離心管中，加入6gNaCl，25mL超

　　純水混勻，超聲浸泡30min。加入15mL含0.1%乙酸的乙腈，振蕩20min，以4500r/min離心6min，取10mL上清液至50mL雞心瓶中，旋轉蒸發至近干，氮氣吹干，用乙酸乙酯–環己烷(體積比為1∶1)10mL溶解殘渣，過濾紙至GPC進樣瓶中，待凈化。

　　1.3.2樣品凈化

　　對于天麻樣品采用凈化法1——凝膠滲透色譜(GPC)凈化;杜仲、金銀花、山茱萸等樣品采用凈化法2——GPC–SPE固相萃取進行凈化。

　　(1)凈化法1(天麻)GPC凈化條件。凝膠柱：內徑25mm，柱長400mm，填料為Bio-Beads-S–X3Beads(38～74μm)或相當者;流動相：乙酸乙酯–環己烷(體積比為1∶1);流速：5.0mL/min;進樣量：5mL;收集時間：900～1900s;在線濃縮至2mL，氮氣吹至近干，1mL乙腈溶解定容，待檢測。

　　(2)凈化法2(杜仲、金銀花、山茱萸)。提取液經GPC凈化，GPC凈化參數同1.3.2(1)，將900～1900s經GPC凈化后的流出液氮氣吹干，然后進行SPE凈化過程，5mL乙腈洗滌濃縮瓶，洗滌液合并上樣，10mL乙腈洗脫，收集全部流出液，旋轉蒸發至近干，氮氣吹干，1.0mL乙腈溶解定容，待檢測。

　　1.4氣相色譜–質譜分析條件

　　1.4.1氣相色譜條件

　　色譜柱：HP–5MS(30m×0.25mm，0.25μm，美國Agilent公司);載氣：氦氣(純度不小于99.999%)，流量1.0mL/min;進樣量1.0μL，不分流進樣(1min后開啟);進樣口溫度：250℃;程序升溫：初始溫度60℃，保持2min，以15℃/min升到150℃，再以3℃/min升到180℃，保持2min，以5℃/min升到280℃，保持3min;質譜連接口溫度：280℃。

　　1.4.2質譜條件

　　電子轟擊離子源：EI;電離能：70eV;離子源溫度：230℃;四*桿溫度：150℃;掃描模式：選擇離子監測(SIM)。81種農藥測定參數見表1。

　　2結果與討論

　　2.1提取條件

　　2.1.1提取方式

　　中藥材中農藥殘留的提取方法主要有超聲波提取法和加速溶劑萃取法，由于加速溶劑萃取法需要專門的儀器設備，而超聲波提取法對實驗條件要求較低，便于應用，故本實驗采用超聲波提取法對中藥材中的農藥殘留進行提取。

　　2.1.2提取溶劑

　　分別考察乙腈、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷作為提取溶劑對中藥材中農藥殘留的提取效果。稱取4份6.00g中藥材平行樣品，加入25mL超純水，超聲浸泡30min后分別加入15mL乙腈、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷，振蕩提取20min，由于乙腈與水互溶，加入過飽和的氯化鈉溶液，利用鹽析作用使水相和有機相分離，以除去水和水溶性雜質，同時還可減少提取液中的雜質含量并提高待測組分在有機相中的分配比。結果表明，乙酸乙酯和丙酮對絕大多數農藥有較大的溶解度，易將農藥提取出來，但同時大量雜質也被提取出來，給凈化帶來困難;二氯甲烷對部分農藥的提取回收率只有20%左右;乙腈回收率高，提取液雜質含量少，故采用乙腈作為提取溶劑。由于部分農藥在弱酸性條件下性質穩定，因此

　　采用含0.1%乙酸的乙腈進行提取。*終確定的提取方法：6.00g樣品加25mL超純水，超聲浸泡30min后加入15mL含0.1%乙酸的乙腈，振蕩提取20min。

　　2.2凈化條件

　　參考凝膠滲透色譜在甘草及其提取物中農藥殘留凈化方法中的應用，對天麻、杜仲、金銀花、山茱萸進行GPC凈化實驗，實驗結果表明：天麻回收率為78.5%～120.8%，而杜仲、金銀花、山茱萸可能存在基質抑制效應而回收率偏低。GPC主要去除糖、色素、油脂等大分子，杜仲、金銀花、山茱萸經過GPC凈化后還存在一些小分子雜質(有機酸和甾醇等)，產生基質抑制效應，需要進行進一步凈化，參考相關文獻，選取PSA固相萃取小柱進行進一步的凈化，經過GPC凈化的收集液，使用氮氣吹干，以5mL乙腈溶解上樣，5mL乙腈洗滌濃縮瓶，洗滌液合并上樣，5mL乙腈洗脫，整個凈化過程保持流速2～3mL/min，收集所有流出液，旋轉蒸發至近干，用氮氣吹干，1.0mL乙腈定容。

　　2.3線性方程、回收率、精密度和檢出限

　　以峰面積Y對農藥質量濃度X進行線性回歸，得到線性方程，以3倍信噪比計算檢出限，結果見表2。

　　選取陜南出產具有代表性的中藥材：天麻、杜仲、金銀花、山茱萸，在1，5，10μg/kg3個添加水平下進行加標回收試驗，每個添加水平做6次平行測定，其中杜仲在添加1μg/kg時，回收率為60.8%～128.9%，相對標準偏差(RSD)為5.9%～21.7%;添加5μg/kg時，回收率為66.0%～127.3%，RSD為7.6%～18.9%;添加10μg/kg時，回收率為69.0%～127.3%，RSD為7.7%～14.9%。天麻的回收率為78.5%～120.8%，RSD為7.6%～13.1%。山茱萸的回收率為71.7%～116.3%，RSD為10.3%～11.6%。金銀花的回收率為72.9%～116.0%，RSD為8.7%～18.9%。

　　3結語

　　建立了天麻、杜仲、金銀花和山茱萸中81種農藥殘留同時檢測的氣相色譜-質譜法。中藥材中的農藥殘留提取液經GPC或GPC–SPE固相萃取小柱凈化后用GC–MS法測定，天麻、杜仲、金銀花和山茱萸的加標回收率較高。該方法操作簡單、凈化效果好、靈敏度高，準確度和精密度均符合多殘留分析的要求。