脫氫乙酸是國家批準使用的人工合成防腐劑，近年來被廣泛使用。脫氫乙酸是一種廣譜、抑菌力*強的防霉防腐劑，對霉菌、酵母菌、細菌有較強的抑制能力[1]，但對人和動物存在一定的毒害性，其添加必須在規定范圍內按規定限量使用。GB2760–2011《食品添加劑使用衛生標準》中規定脫氫乙酸用于月餅中的*大使用量為0.5g/kg[2]，然而目前存在企業違規超標使用的現象，因此對月餅中的脫氫乙酸進行準確、快速的定量檢測非常重要。食品中脫氫乙酸的檢測方法一般依據國家標GB5009.121–2003，樣品經過有機相、無機相反復萃取凈化后用氣相色譜測定[3]。由于該標準僅適用于果汁、腐乳、醬菜，在處理月餅等高糖、高脂、高蛋白含量的復雜基質的樣品時，乙醚提取過程的乳化現象特別嚴重，影響了提取率，回收率較低;而且采用填充柱作為分離柱，其柱效低，靈敏度不高，檢出限、分離效果和重現性都不理想。因此，建立一套適合月餅等復雜基質食品中脫氫乙酸的氣相色譜檢測方法，對于提升食品質量監督檢驗能力，規范食品生產秩序具有重要的意義。

　　筆者以月餅為試材，針對乙醚提取過程中乳化嚴重的問題，改進了樣品前處理方法，選用Rtx-5弱*性毛細管柱作為分離柱[4]，優化GC色譜條件，建

　　立了毛細管柱氣相色譜法測定月餅等復雜基質食品中脫氫乙酸的方法，并對所建立的檢測方法進行了系統的方法驗證。

　　1實驗部分

　　1.1主要儀器與試劑

　　氣相色譜儀：GC–2010Plus型，日本島津制作所;自動進樣器：AOC–20i+S型，日本島津制作所;乙醚、丙酮：重蒸;無水硫酸鈉、氯化鈉：分析純;硫酸：10%(體積分數);硫酸鋅溶液：120g/L;氫氧化鈉溶液：20g/L;脫氫乙酸標準品：純度大于99.5%，國家標準物質中心;實驗用水為三級水。

　　1.2試樣制備與提取

　　稱取5.0g充分磨碎的均勻試樣于100mL容量瓶中，加入20mL蒸餾水，5mL硫酸鋅溶液，搖勻，用氫氧化鈉溶液調節pH值至7～8，加水定容至刻度，過濾。準確吸取20.0mL濾液于100mL比色管中，加氯化鈉至飽和，用硫酸調節pH值至酸性，分別用50，50，30mL乙醚提取3次，靜置分層，用吸管轉移乙醚層，經無水硫酸鈉脫水后，收集乙醚于250mL錐形瓶中，50℃水浴中濃縮至近干，氮吹除去殘留溶劑，用丙酮定容后供色譜測定。

　　1.3色譜條件

　　色譜柱：Rtx-5毛細管柱(30m×0.32mm，0.25μm，美國Restek公司);進樣量：0.5μL;分流比：1∶40;進樣口溫度：240℃;線速度：25.0mL/min;柱流量：0.95mL/min;柱溫：50℃保持1min，以15℃/min的速率升溫至230℃，保持2min;檢測器：FID;檢測器溫度：240℃;尾吹：30.0mL/min;H2流速：40mL/min;空氣流速：400mL/min。

　　2結果與討論

　　2.1色譜條件的選擇

　　本實驗選擇弱*性Rtx-5毛細管柱，采用程序升溫，目標峰分離度良好，峰型較佳，保留時間在8.4min左右。色譜條件見1.3，標樣氣相色譜圖見圖1。

　　2.2改進樣品前處理對測定結果的影響

　　實驗分別采用本實驗方法和國標GB/T5009.121–2003中的處理方法對月餅中脫氫乙酸的含量進行測定，結果見表1。由表1可以看出，采用本法測得的試樣含量高于國標法處理的試樣，且回收率明顯高于未進行沉淀蛋白處理的試樣，這說明經硫酸鋅試劑沉淀和過濾處理，可以有效減輕有機相萃取時出現的乳化現象，有利于萃取完全;本法中樣品提取過程處理簡單，回收率高，且節約了有機溶劑。

　　2.3線性方程與線性范圍

　　將濃度分別為0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mg/mL的脫氫乙酸標準溶液，按照上述色譜條件，進樣0.5μL，進行GC分析，測定不同濃度脫氫乙酸的峰面積，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，結果見表2。

　　2.4檢出限與定量限

　　方法的檢出限[5]是指在通過某一分析方法全部測定過程后，被分析物產生的信號，能以95%置信度區別于空白樣品而被測定出來的*低濃度。以“*低濃度檢測結果+3倍標準差”作為檢出限。IUPAC定義定量限(LQD)為“當被測組分濃度能

　　產生比空白足夠大的信號，這個信號能被良好操作實驗室在常規操作條件下以指定的置信水平定量檢出，這個濃度就是定量測定下限”，即可以“*低濃度檢測結果+10倍標準差”所對應的濃度作為定量限[7]。

　　本試驗將樣本溶液不斷稀釋，按照1.3色譜條件，進樣0.5μL，進行GC分析，確定檢出限，直到目標物的峰高與基線噪音之比為2～3時[6]，連續重復測定9次，根據每次的積分峰面積，外標法計算其對應的濃度，計算標準差s，結果見表3。

　　本試驗以信噪比S/N=3計，經計算，檢出限為0.24μg/mL，定量下限為0.32μg/mL。以稱樣量5.0g計，本方法檢測月餅中脫氫乙酸的檢出限約為4.8mg/kg，可以滿足檢測需要[3]。

　　2.5加標回收試驗

　　選取月餅樣品5份，以雙平行測定結果的平均值作為樣品中脫氫乙酸的實際含量，加入一定量標準品后，使其每份含標準物質0.2g/kg，再以雙平行測定結果的平均值作為加標結果，計算加標回收率，檢測結果見表4。由表4可知，脫氫乙酸的回收率在87.9%～94.4%之間。

　　2.6精密度試驗

　　取樣品12份，加標樣使每份樣品含標準物質0.3g/kg，分別按1.2的方法進行處理，各進樣0.5μL進行GC分析，以外標法定量，結果見表5。由表5可知，測定結果的相對標準偏差為2.5%，說明該方法具有較高的精密度。

　　3結論

　　選用Rtx-5弱*性毛細管柱測定月餅中的脫氫乙酸，通過優化色譜條件，獲得了良好的峰型和分離度，建立了*佳GC測定條件;針對月餅基質復雜，蛋白、脂類、糖類含量高，改進了樣品提取及凈化方法，消除了乙醚提取過程中的乳化現象，提高了萃取效率。通過驗證，證實該方法可以準確地進行月餅等復雜基質中脫氫乙酸的定性、定量分析檢測，具有一定的應用推廣價值。