透明質(zhì)酸鈉是一種天然直鏈多糖，由（1→4）-β-D葡萄糖醛酸和（1→3）-2-乙酞氨基-β-D-葡萄糖結(jié)合而成的雙糖結(jié)構(gòu)單元所組成。根據(jù)透明質(zhì)酸鈉結(jié)構(gòu)單元的特性，對其進行深加工后制成的醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠是一種無種屬特異性、無毒、溶解性能好、生物相容性良好的新型生物材料，被廣泛用于多種眼科手術(shù)，用于防治外傷性或退變性骨關(guān)節(jié)炎，還可用于普通外科、婦產(chǎn)科等腹、盆腔手術(shù)預(yù)防術(shù)后腸粘連和盆腔粘連，及肌健、關(guān)節(jié)和神經(jīng)手術(shù)預(yù)防組織粘連。

醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠作為一種植人體內(nèi)的醫(yī)用生物材料必須嚴(yán)格控制各類雜質(zhì)的含量，以確保產(chǎn)品使用的安全性和有效性。醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠在提純和干燥生產(chǎn)工藝中需要使用的乙醇很難完全揮發(fā)掉，微量乙醇的存在將使產(chǎn)品在使用過程中對患者產(chǎn)生不同程度的刺激反應(yīng)，通常可致疼痛，并影響關(guān)節(jié)活動及其它許多器官系統(tǒng)的功能，故應(yīng)嚴(yán)格控制乙醇的殘留量。筆者按YY0308–2004［1］要求，采用頂空氣相色譜法測定了醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠中的乙醇?xì)埩袅浚罁?jù)JJFl059–1999［2］、CNAS–GL06［3］，對測量結(jié)果的不確定度進行了系統(tǒng)分析，找出影響的主要因素，并對各不確定度分量進行了評定和量化。

1實驗部分

1.1主要儀器與試劑

氣相色譜儀：PerkinElmerClarus680型，配有氫火焰離子化檢測器（FID），美國PE公司；頂空自動進樣器：PerkinElmerTurbomatrix40型，美國PE公司；20mL頂空瓶（帶聚四氟乙烯薄膜膠塞密封墊）；電子天平：MettlerAB104型，瑞士梅特勒公司；乙醇純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：99.8%，中國計量科學(xué)研究院；實驗用水為純化水。

1.2實驗條件

1.2.1氣相色譜分析條件

色譜柱：DB–1型（60m×0.32mm，0.5μm，美國安捷倫公司）；柱溫：50℃，保持2min，以10℃／min的速率升至160℃，保持5min；分流比：1∶2；進樣器、檢測器溫度：180℃。

1.2.2頂空分析條件

爐溫：80℃；進樣針溫度：100℃；傳輸線溫度：120℃；平衡時間：30min。

1.3實驗方法

乙醇標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液的配制：取外部干燥的100mL量瓶，加入約30mL水，精密稱取乙醇純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.1g于該容量瓶中，加水至刻度，搖勻。此溶液濃度為1mg／mL。乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：用1.0，2.0，3.0，5.0mL的單標(biāo)線吸量管分別吸取乙醇標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.0，2.0，3.0，5.0mL于10mL容量瓶中，加水定容，配制成濃度為100，200，300，400，500μg／mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。樣品制備：精密稱取1.0g樣品于20mL頂空瓶中，加入5.0mL水，壓蓋密封。分別將系列標(biāo)準(zhǔn)溶液與樣品溶液置于頂空進樣器上，按1.2實驗條件進行測定，記錄峰高，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算樣品中乙醇的含量。

2數(shù)學(xué)模型

乙醇?xì)埩袅繙y定結(jié)果按式(1)計算：

3測量不確定度來源

頂空氣相色譜法測定醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠中乙醇?xì)埩袅康牟淮_定度主要來源：（1）乙醇純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度;（2）稱量引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度；

（3）標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液配制過程中引入的不確定度；色譜測定過程引入的不確定度。

4測量不確定度各分量的評定

4.1乙醇純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度urel(c)

根據(jù)中國計量科學(xué)研究院提供的證書信息，乙醇純度的標(biāo)準(zhǔn)值為99.8%，擴展不確定度為0.3%(k=2)，則乙醇純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為0.3%／2=1.5×10–3，相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

4.2稱量引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度

（1）標(biāo)準(zhǔn)品稱量引入的不確定度：稱取量為0.1040g，根據(jù)天平檢定證書，其*大允許誤差為±0.5mg，按矩形分布考慮，則標(biāo)準(zhǔn)品稱量引入的相對不確定度：

（2）樣品稱量引入的不確定度：稱取量為1.0000g，根據(jù)天平檢定證書，其*大允許誤差為±0.5mg，按矩形分布考慮，則標(biāo)準(zhǔn)品稱量引入的相對不確定度為：

則稱量引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

4.3溶液配制過程中引入的不確定度

（1）玻璃量器校準(zhǔn)引入的不確定度：配制標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液所用的玻璃量器均有誤差［4］，按三角分布考慮，k=6估算標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液配制過程使用的系列玻璃量器因校準(zhǔn)引入的相對不確定度分量見表1。

（2）溫度變化引入的不確定度：實驗所用玻璃

量器已于20℃校準(zhǔn)，水的膨脹系數(shù)為2.1×10–4／℃，假設(shè)實驗時溫度在±3℃之間波動，按矩形分布考慮，k=3，則體積變化引入的不確定度(mL)為(V×2.1×10–4×3)／3，結(jié)果見表1。由玻璃量器校準(zhǔn)和溫度變化引入的相對標(biāo)準(zhǔn)

不確定度urel(V)：

4.4色譜測定引入的不確定度

（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的建立：以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，氣相色譜法所測得的峰高值為縱坐標(biāo)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，并據(jù)此建立標(biāo)準(zhǔn)曲線方程（標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合數(shù)據(jù)見表2）。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)偏差即測定值和擬合值之間殘差的標(biāo)準(zhǔn)偏差s：

（4）重復(fù)測定和樣品的不均勻性引入的不確定。采用同批樣品平行取樣測定6次，乙醇?xì)埩袅繛?14.19，341.56，341.62，346.12，344.28，352.19μg／g，平均值為344.49μg／g，按A類不確定度評定，則相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(X)：

將上述兩項不確定度分量合成色譜測定引入的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

5合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度及擴展不確定度相對標(biāo)準(zhǔn)不確定匯總見表3。

（2）合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度。由上述幾項相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量可求出合成相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

（3）擴展不確定度。取包含因子k=2，則相對擴展不確定度：

樣品的稱量為m=1.0000g，樣品稀釋體積為5.0mL，從標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算得到測量樣品（2次）中乙醇的濃度平均值為c0=68.82μg／mL,樣品中乙醇的含量由(1)式計算得：

測量樣品中乙醇含量的擴展不確定度醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠中乙醇含量的測定結(jié)果表示為(344.10±37.51)μg／g，k=2。

6結(jié)語

通過對醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠中乙醇?xì)埩袅繙y量不確定度的評定，發(fā)現(xiàn)影響測量不確定度的主要因素是標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合及重復(fù)測定和樣品的不均勻性。因此在測試樣品時應(yīng)嚴(yán)格控制實驗條件，按照規(guī)范操作，并把儀器調(diào)整至*佳狀態(tài)，以保證測量結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。