茶葉中所含的多酚類物質(zhì)是一種以兒茶素為主體的酚類化合物，是茶多酚的主體成分，兒茶素約占茶多酚總量的65%～80%,主要包括沒食子酸（GA）、表沒食子兒茶素（EGC）、表兒茶素（EC）、兒茶素（+C）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、沒食子基兒茶素沒食子酸酯（GCG）和表兒茶素沒食子酸酯（ECG）等。開發(fā)和利用天然抗氧化劑已經(jīng)成為當(dāng)今世界食品藥品科技發(fā)展的方向。兒茶素作為一種重要的抗氧化劑，主要用于抗癌、抗腫瘤、清除人體自由基，還可用于防止齲齒、抑菌等。研究發(fā)現(xiàn)EGCG在體內(nèi)外對許多腫瘤細(xì)胞增殖具有抑制作用［1］。目前測定兒茶素組分的**方法為高效液相色譜（HPLC）法［2–6］。我國現(xiàn)行檢測茶葉中兒茶素組分及咖啡堿（CAF）的*新國家標(biāo)準(zhǔn)GB／T8313–2008［7］也是HPLC法，該法采用甲醇多次提取法對樣品進(jìn)行前處理，操作繁瑣，流動相組成復(fù)雜，樣品分析時間過長，所需試劑和儀器多且昂貴。

筆者采用水提法進(jìn)行樣品浸提，并與GB／T8313–2008進(jìn)行比較，結(jié)果表明所建立的方法操作簡單，成本低，效率高，使用范圍廣，能同時測定7種兒茶素組分及咖啡堿，效果較好。

1實(shí)驗部分

1.1主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent1260型，美國安捷倫科技有限公司；電子天平：BSA224S–CW型，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；恒溫水浴鍋：HH·SY21–Ni8型，北京長源實(shí)驗設(shè)備廠；抽濾裝置：2XZ–0.5型，浙江黃巖黎明實(shí)業(yè)公司；超純水制備器：TST–RO–20型，石家莊泰斯特儀器設(shè)備有限公司；數(shù)控超聲清洗器：KQ5200DE型，昆山市超聲儀器有限公司；離心機(jī)：TGL–20bR型，上海安亭科學(xué)儀器廠；快速混勻器：SK–1型，金壇市杰瑞爾電器有限公司；甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、乙睛：均為色譜純；乙酸、乙二胺四乙酸（EDTA）、抗壞血酸：均為分析純；GA，CAF，EGC，+C，EC，EGCG，GCG，ECG混合對照品：國家植物功能成分利用工程技術(shù)研究中心／教育部茶學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗室；各兒茶素組分及咖啡堿對照品：純度均不小于98%，北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司；實(shí)驗用水為純凈水。

1.2色譜條件

色譜柱：C18（250mm×4.6mm，5μm）；柱溫：35℃；紫外檢測器波長：278nm；流動相：A相（超純水），B相（N,N-二甲基甲酰胺︰甲醇︰冰乙酸=40︰2︰1.5）；流動相流速：1.0mL／min；進(jìn)樣量：5μL。

1.3對照品溶液的配制

精密稱取GA，CAF，EGC，+C，EC，EGCG，GCG，ECG混合對照品適量，加純凈水配制成分別含9.71μg／mLGA，101.97μg／mLCAF，81.09μg／mLEGC，7.35μg／mL+C，64.23μg／mLEC，400.16μg／mLEGCG，7.27μg／mLGCG，91.83μg／mLECG的混合對照品溶液。

1.4供試品溶液的制備

取部分水提取液（GB／T8305–1987）［8］過0.45μm水系微孔濾膜。在1.2色譜條件下進(jìn)行測定。采用保留時間識別各目標(biāo)組分，以外標(biāo)法確定相應(yīng)組分的濃度。

2結(jié)果與分析

2.1色譜圖

在1.2色譜條件下取供試品溶液5μL進(jìn)樣，記錄色譜圖。GB／T8305–1987水提取法色譜圖如圖1所示。

按照GB／T813–2008甲醇提取法進(jìn)行樣品處理后進(jìn)樣分析（不含GCG），供試品的色譜圖如圖2所示。圖2表明，甲醇提取法樣品中的EGCG與EC不能有效分離。

2.2線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)

分別精密吸取混合對照品溶液2.5，5.0，7.5，10，12.5和15μL［9］，按1.2色譜條件進(jìn)樣測定，同一體積的樣品平行分析3次，取其平均值。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量（X，μL）為橫坐標(biāo)作圖，得到各組分的線性回歸方程如表1。由表1可知，當(dāng)對照品溶液進(jìn)樣量在2.5～15μL，GA，CAF，EGC，DL-C+C，EC，EGCG，GCG和ECG8種組分的進(jìn)樣量分別在0.0243～0.1456，0.2549～1.5296，0.2027～1.2164，0.0182～0.1102，0.1606～0.9634，1.0004～6.0024，0.0182～0.1090，0.2296～1.3774μg范圍內(nèi)與色譜峰面積的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r為0.9910～0.9999。

2.3加標(biāo)回收率及精密度

吸取9份已知含量的綠茶提取液各1mL，分為3組，每組3份。分別加入混合對照品溶液0.5，1.0，1.5mL，按實(shí)驗方法進(jìn)行測定，計算GA，CAF，ECG，+C，EC，EGCG，GCG和ECG的含量，計算各組分的回收率及精密度，結(jié)果見表2。由表2可知，所有組分的回收率在98.60%～100.17%之間，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD)均小于0.48%，說明該方法重現(xiàn)性良好，檢測結(jié)果可靠，滿足檢測要求。

2.4樣品測定

取同一批號樣品6份，分別在1.2色譜條件下及按照國標(biāo)方法進(jìn)行6次平行測定，取平均值作為測定結(jié)果，見表3。由表3可知，與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)方法相比，水提取法測定結(jié)果的相對偏差在0.47%～5.55%之間。另外，水提法有部分脂溶性兒茶素不能完全溶出，而GB／T8313–2008甲醇提取法EGC，EGCG和ECG的含量相對較高；GA和+C測定結(jié)果差別不大，在誤差范圍內(nèi)；用70%的甲醇溶液提取，雖然提取完全，但提取液中含有大量的葉綠素，進(jìn)行液相色譜檢測時泵壓明顯增大，對色譜柱污染嚴(yán)重，使柱壽命縮短；甲醇提取法樣品中的EGCG和EC不能分離，對色譜柱的要求較高；甲醇提取法操作也較繁瑣，有機(jī)溶劑用量較大，不利于環(huán)保和節(jié)約成本。用水提取樣品不僅能達(dá)到較好的提取效果，且可以直接利用水浸出物的提取液，無需重新浸提，步驟簡便，成本較低。

3結(jié)語

用水浸出方式提取綠茶樣品，HPLC法測定茶葉中的兒茶素和咖啡堿，操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確。