鹽酸法舒地爾（fasudilhydrochloride），化學(xué)名稱為六氫-1-(5-磺酰基異喹啉)-1(H)-1，4-二氮雜卓鹽酸鹽，是一種肌球蛋白輕鏈磷酸化酶、RHO激酶抑制劑和新型細(xì)胞內(nèi)鈣離子抗結(jié)劑，該藥能改善腦組織微循環(huán)，保護(hù)缺血腦組織，促進(jìn)神經(jīng)再生。高哌嗪是鹽酸法舒地爾合成工藝中用到的一種原料［1］，通常要求其相對(duì)于鹽酸法舒地爾的殘留量不得超過0.1%。已有文獻(xiàn)報(bào)道采用液相色譜法［2–3］、紫外分光光度法［4］檢測(cè)鹽酸法舒地爾中法舒地爾含量及氣相色譜法［5］測(cè)定鹽酸法舒地爾中殘留溶劑的含量。而至今未見關(guān)于離子色譜法檢測(cè)鹽酸法舒地爾及原料高哌嗪的報(bào)道。筆者建立了非抑制電導(dǎo)陽離子色譜法測(cè)定鹽酸法舒地爾原料藥中高哌嗪的含量，方法準(zhǔn)確度高、精密度好、簡便易行，可用于鹽酸法舒地爾生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制。

1.實(shí)驗(yàn)部分

1．1主要儀器與試劑

離子色譜儀：CIC–300型，內(nèi)置柱溫箱，青島盛瀚色譜技術(shù)有限公司；優(yōu)普超純水機(jī)：UPL–II型，成都優(yōu)普純水儀有限公司；電子天平：AL104型，瑞士梅特勒–托利多儀器有限公司；甲烷磺酸：分析純，國藥集團(tuán)藥業(yè)有限公司；乙腈：色譜純，德國Merk公司；高哌嗪對(duì)照品、鹽酸法舒地爾：某制藥廠提供；實(shí)驗(yàn)用水均為超純水（電阻率18.2MΩ·cm）。

1．2色譜條件

色譜柱：SH–CC–3柱（100mm×4.6mm）；淋洗液：5.0mmol／L甲烷磺酸–乙腈（體積比90∶10），流速為0.7mL／min；柱溫：30℃；直接電導(dǎo)檢測(cè)；進(jìn)樣量：100μL。

1．3溶液配制

高哌嗪對(duì)照品溶液：1mg／mL，精密稱取高哌嗪對(duì)照品適量，用超純水溶解并稀釋而成；系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液：準(zhǔn)確稱取鹽酸法舒地爾和高哌嗪對(duì)照品適量，用超純水溶解并稀釋制成鹽酸法舒地爾質(zhì)量濃度為3mg／mL、高哌嗪質(zhì)量濃度為3μg／mL的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液；供試品溶液：取鹽酸法舒地爾約0.5g，精密稱定，置于25mL量瓶中，加超純水溶解并稀釋至標(biāo)線，搖勻，作為供試品溶液。

2結(jié)果與討論

2．1淋洗液的選擇

高哌嗪的測(cè)定參照離子色譜測(cè)試方法（中國藥典2010年版二部附錄VJ［6］）規(guī)定。根據(jù)法舒地爾及高哌嗪的化學(xué)結(jié)構(gòu)選擇以羧酸基鍵合硅膠基質(zhì)作為填料的離子色譜柱。分別研究了濃度為2.5，5.0，7.5mmol／L甲烷磺酸淋洗條件下系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中高哌嗪和法舒地爾的出峰及分離情況。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)即使甲烷磺酸濃度高達(dá)7.5mmol／L時(shí)，60min內(nèi)只有高哌嗪能夠出峰，法舒地爾不出峰，且高哌嗪峰與系統(tǒng)峰分離效果不佳。因此考慮選取在中間濃度5mmol／L甲烷磺酸淋洗液中加入一定量的有機(jī)溶劑（如乙腈）來縮短法舒地爾出峰時(shí)間。由于此款色譜柱所容許耐受的有機(jī)溶劑的*高使用*限為15%（體積分?jǐn)?shù)），故選擇乙腈的體積分?jǐn)?shù)為5%，10%，15%進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)。結(jié)果表明，當(dāng)乙腈體積分?jǐn)?shù)為5%時(shí)，分析時(shí)間太長無法滿足要求；當(dāng)乙腈體積分?jǐn)?shù)為10%，15%時(shí)，分析時(shí)間可以滿足要求。考慮到色譜柱使用過程中長期處于有機(jī)溶劑*大耐受*限可能會(huì)縮短色譜柱的使用壽命，甚至造成不可逆轉(zhuǎn)的損傷，故*終選擇5mmol／L甲烷磺酸添加10%乙腈作為淋洗液，既可以滿足實(shí)驗(yàn)需要又能保證在合適的條件下使用色譜柱。

2．2淋洗液流速的選擇

除淋洗液組成外，淋洗液流速也是影響分離度和色譜峰形的關(guān)鍵因素之一。實(shí)驗(yàn)考察了淋洗液流速分別為0.5，0.7，0.9mL／min時(shí)對(duì)分離效果的影響。結(jié)果表明，低流速下分析時(shí)間長，色譜峰形不好；而較高流速下，柱子長時(shí)間在高壓狀態(tài)下工作容易造成柱子損傷；當(dāng)流速為0.7mL／min時(shí)柱壓適宜且分離效果良好、峰形理想，滿足實(shí)驗(yàn)要求。

2．3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

按照1.2色譜條件及進(jìn)樣方法，做系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，色譜圖見圖1。圖1色譜圖中，高哌嗪和法舒地爾的分離度為6.6，理論塔板數(shù)按高哌嗪峰計(jì)算大于1000。

2．4工作曲線方程

精密吸取高哌嗪對(duì)照品溶液，逐級(jí)稀釋后配制成質(zhì)量濃度分別為2.0，4.0，8.0，10.0，20.0μg／mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在1.2色譜條件下測(cè)定。以色譜峰面積Y對(duì)高哌嗪質(zhì)量濃度X進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程為Y=2.0×107X–2159.2，相關(guān)系數(shù)r=0.9924。高哌嗪對(duì)照品溶液色譜圖見圖2。

2．5檢出限與定量限

稀釋高哌嗪對(duì)照品溶液并進(jìn)樣分析，至高哌嗪色譜峰近基線波動(dòng)，重復(fù)進(jìn)樣3次。當(dāng)S／N=3∶1時(shí)，計(jì)算高哌嗪的檢出限為0.0494μg／mL；當(dāng)S／N=10∶1時(shí)，計(jì)算高哌嗪的定量限為0.151μg／mL。

2．6精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，在1.2色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，高哌嗪峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.47%，結(jié)果見表1。

2．7空白樣品測(cè)定

對(duì)6份空白鹽酸法舒地爾樣品溶液進(jìn)樣分析，結(jié)果顯示，樣品溶液中未檢出高哌嗪殘留，見圖3。

2．8回收試驗(yàn)

在3mg／mL空白鹽酸法舒地爾溶液中加入2.4，3.0，3.6μg／mL3個(gè)水平的高哌嗪溶液進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，結(jié)果見表2。由表2可知加標(biāo)回收率為97.6%～98.7%。

2．9耐用性試驗(yàn)

在1.2色譜條件下，分別控制淋洗液流速（0.7mL／min）變化±0.14mL／min、柱溫（30℃）變化±5℃、甲烷磺酸濃度（5.0mmol／L）變化±2.5mmol／L、乙腈體積分?jǐn)?shù)（10%）變化±5%時(shí)，計(jì)算對(duì)照品溶液色譜峰面積結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表3。由表3可知，在所選實(shí)驗(yàn)參數(shù)變化范圍內(nèi)，高哌嗪對(duì)照品峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于0.5%，證明了所建立方法的可靠性。

3結(jié)語

采用離子色譜法測(cè)定鹽酸法舒地爾中高哌嗪含量，具有靈敏度、準(zhǔn)確度高，精密度好，操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，為鹽酸法舒地爾的質(zhì)量控制提供了參考。該法適用于實(shí)際生產(chǎn)中中間體測(cè)定與成品的快速檢測(cè)，減少了液相色譜分析中有機(jī)相的使用，有利于環(huán)境環(huán)保。