葡萄酒生產工藝決定葡萄酒的生產需要一個較長的釀制過程。一些生產廠商為了快速謀取暴利，利用著色劑及其它原料勾兌生產假冒葡萄酒，嚴重危害人體健康。GB15037–2006［1］規定，葡萄酒中不得添加合成著色劑、甜味素、香精、增稠劑。人工合成著色劑莧菜紅及亮藍是兩種較常使用在葡萄酒中的人工合成色素。因此葡萄酒中莧菜紅及亮藍的監測具有重要意義。

GB／T5009.35–2003［2］規定食品、飲料、配制酒中合成著色劑的測定方法有高效液相色譜法［3］、薄層色譜法［4］、示波*譜法［5］，這些方法均需樣品預處理，操作繁瑣，不利于快速分析。GB／T15038–2006［6］中未介紹葡萄酒中合成色素的檢測方法，葡1實驗部分

1.1主要儀器與試劑

高效毛細管電泳儀：TH–3000型，保定天惠分離科學研究所；未涂層毛細管：河北永年光導纖維廠；自動雙重純水蒸餾器：SZ–93型，上海亞榮生化儀器廠；酸度計：pHS–3C型，上海偉業儀器廠；檸檬酸、β–環糊精、氫氧化鈉、鹽酸：分析純；莧菜紅、亮藍：國家標準物質研制中心；葡萄酒樣品：保定市疾病預防控制中心；實驗室用水均為二次蒸餾水。

1.2溶液配制

樣品緩沖溶液：10mmol／L檸檬酸。標準溶液：分別移取0.10，0.25，0.50，1.00，2.00，5.00，10.00mL的0.5mg／mL莧菜紅標準品溶液及0.5mg／mL亮藍標準品溶液于25mL容量瓶中，用樣品緩沖溶液定容至標線，搖勻，配制成2，5，10，20，40，100，200mg／L的莧菜紅及亮藍標準溶液。

1.3電泳分離條件

分離緩沖溶液：10mmmol／L檸檬酸溶液–5mmmol／Lβ–環糊精溶液(pH2.6)；未涂層彈性石英毛細管柱：50cm×75μm，有效長度為39cm；壓力進樣：20kPa，3s；電泳電壓：20kV；電泳溫度：室溫；檢測波長：220nm。新毛細管在使用前以1mol／L鹽酸溶液及1mol／L氫氧化鈉溶液沖洗20min，然后用二次蒸餾水和分離緩沖液分別沖洗5min。每次分析樣品后用分離緩沖溶液沖洗毛細管柱2min以保證重現性。

2結果與討論

2.1檢測波長的選擇

亮藍在紫外區*大吸收波長為220nm，莧菜紅在220nm處亦有較大紫外吸收［10］，緩沖溶液背景在220nm處干擾較小。為實現兩者的同時測定且在獲得盡可能高的靈敏度同時避免基體干擾，本實驗選擇220nm作為檢測波長。

2.2分離緩沖體系選擇

莧菜紅及亮藍分子結構中均含有磺酸基，在一定條件下電離成帶一個或多個負電荷的粒子，產生電泳行為。在堿性條件下，莧菜紅及亮藍分子電離后帶負電荷，正*進樣后其電遷移方向為負*到正*，與電滲流方向相反，當電滲流足夠大時才能從負*流出毛細管柱，產生色譜峰。在酸性條件下，負*進樣后，其電遷移方向為負*到正*，當離子電泳淌度大于電滲淌度時可從正*流出毛細管柱，產生色譜峰。分別選取磷酸鹽體系、NaAc–HAc體系、硼砂體系及檸檬酸緩沖體系進行試驗，結果表明，磷酸鹽體系及硼砂體系中莧菜紅不出峰，且分析樣品時雜質峰干擾嚴重；而在NaAc–HAc體系中亮藍及莧菜紅出峰時間過長；檸檬酸緩沖體系中莧菜紅及亮藍保留時間合適且峰形較尖銳，測定樣品時莧菜紅及亮藍先于雜質峰流出，避免了雜質干擾。本實驗*終選擇檸檬酸緩沖體系，和絕大多數實驗所選用的堿性硼砂體系與磷酸鹽體系不同［11，12］。

2.3分離緩沖溶液pH值對遷移時間的影響

毛細管的電滲流(EOF)對于pH值的改變很敏感，且pH值變化亦可引起分離度以及峰形等參數的改變。較低pH值的檸檬酸緩沖溶液中可以抑制緩沖溶液的電滲流，改變pH值可以改變莧菜紅及亮藍的電泳分離度，提高莧菜紅及亮藍的分離效率?？疾炝藱幟仕崛芤涸趐H2.2～3.0范圍內對遷移時間的影響(見圖1)。結果表明，兩者在pH2.2～3.0范圍內均能達到完全分離，在pH2.4時兩者的保留時間*短，但在測定樣品時當pH2.4時亮藍不出峰，*終選擇緩沖溶液為pH2.6。

2.4分離緩沖液濃度對分離效果的影響

在恒定條件下，增大緩沖液的濃度可以抑制吸附而增加靈敏度，降低電滲流而增加分離效率，但濃度太高會產生較多熱量。在保持pH值及分離電壓不變的條件下，考察5種不同濃度檸檬酸溶液對莧菜紅及亮藍分離情況的影響(見圖2)。結果表明，隨著檸檬酸溶液濃度的增大，分離時間變短，在10mmol／L時莧菜紅及亮藍峰分離度*大，且保留時間較短，*終選擇檸檬酸溶液濃度為10mmol／L。

2.5添加劑對峰形及分離度的影響

考察了十二烷基磺酸鈉(SDS)、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)及β-環糊精對樣品中莧菜紅及亮藍分離情況及峰形的影響，發現SDS及CTAB對樣品中莧菜紅及亮藍的分離情況及峰形無明顯改善，而β-環糊精在分析樣品中的莧菜紅及亮藍時，可明顯改善峰形，使峰形變銳?？疾炝瞬煌瑵舛圈?環糊精對峰形的影響，發現當β-環糊精濃度大于5mmol／L后，莧菜紅及亮藍的峰形變化不明顯，且環糊精容易析出，*終確定β-環糊精的濃度為5mmol／L。

2.6標準工作曲線與檢出限

在1.3實驗條件下對莧菜紅及亮藍標準品進樣分析，以電泳譜圖的峰面積y(μV·s)與對應的質量濃度x(mg／L)進行線性回歸分析，得到莧菜紅及亮藍的線性回歸方程、相關系數(r2)及檢出限(LOD，信噪比為3)，結果見表1。

2.7方法精密度及回收率

取1mL樣品于5mL刻度試管中，用樣品緩沖溶液定容至5mL，混合均勻后直接進樣，按1.3實驗條件進行測定，平行測定7次，計算測定結果的相對標準偏差(RSD)，結果見表2，莧菜紅及亮藍色譜峰見圖3。由表2可知，本實驗測定莧菜紅的方法精密度為1.5%，亮藍的方法精密度為2.9%，表明本方法精密度良好。

取3份已測樣品，分別加入低、中、高3個濃度水平的莧菜紅及亮藍標準品，按1.3實驗條件進樣測定，每個加標水平樣品平行處理6份，莧菜紅及亮藍的加標回收率見表3。

3結語

用高效毛細管電泳法直接測定葡萄酒中莧菜紅及亮藍人工合成色素，該方法具有較高的靈敏度和分辨率，且分離快速、操作簡單、節省溶劑、用樣量少，能滿足實際樣品的分析需求。