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金黃色葡萄球菌的鑒定方法

作者:宋檢 時間:2022-10-21 來源:互聯網

由于目前全球化的發展,世界各地區之間的人流物流日益廣泛和頻繁,病原菌也會隨著這種流動而迅速擴散,并且不像以前要由鄰接地區由近而遠的擴散,而是直接跨越地區、造成國家之間乃至洲之間的迅速擴散。因此,將先進的技術和檢測方法應用于我們的實際工作,可準確的檢測和有效預防因金黃色葡萄球菌引起的食物中毒及各類感染性疾病。現就其檢測方法做一總結。

1 傳統常規培養檢測方法

1.1 直接涂片鏡檢

取標本涂片,革蘭氏染色后鏡檢,可見球形、單個、成對和葡萄串狀排列,革蘭氏染色陽性,無芽胞,無莢膜。根據細菌形態、排列和染色性可作出初步診斷。

1.2 分離培養與鑒定

將標本接種于血瓊脂平板,經37℃培養24h后形成圓形、光滑、大而凸起、濕潤、不透明的菌落,菌落呈金黃色或者白色,有透明溶血環。接種甘露醇培養基經37℃培養24h后,形成淡橙黃色菌落。在Baerd-Parker平板中經37℃培養24h后,菌落為圓形、光滑突起、濕潤,顏色呈灰色到黑色,邊緣為淡色,周圍為一渾濁帶,在其外層有一透明圈。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性,可在7.5%氯化鈉肉湯中生長,因此利用它的這個特性進行污染標本的分離。在純培養分離好的平板上挑取菌落配置菌懸液,在VITEK2微生物鑒定系統用GP卡鑒定。

1.3 血漿凝固酶試驗

吸取0.5ml 兔血漿與0.5ml金黃色葡萄球菌試液浸液肉湯24h 培養物充分混勻,置36±1℃培養,每隔30min 觀察一次,連續觀察6h,出現凝固,即將小試管傾斜或倒置時,內容物不流動,判為陽性。同時做陰陽性對照。

1.4 耐熱核酸酶試驗

將24h 肉湯培養物沸水浴處理15min,用接種環劃線刺種于甲苯胺蘭-DNA 平板,(36±1)°C 培養24h,在刺種線周圍出現淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。

金黃色葡萄球菌的傳統實驗室檢測方法經典、可靠,仍是實驗室一直沿用的檢測方法。但操作復雜,所需事間長,尤其在突發公共衛生事件需要進行流行病學調查和溯源時,很難滿足準確、快速溯源的需要。

2 對金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測方法

2.1從分離菌株培養物中提取葡萄球菌腸毒素
待測菌株接種營養瓊脂斜面,37℃培養24h,用5ml生理鹽水洗下菌落,傾入60ml產毒培養基中,每個菌種種一瓶,37℃震蕩培養48h,震速為100次/min,吸出菌液,100℃加熱10min,8000r/min離心20min,取上清液100ul進行試驗。

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