作者:宋檢 時間:2022-10-24 來源:互聯網
1.色譜柱的清洗
即使樣品和流動相已做過前處理,也仍難以完成避免柱子受到污染,因此必須對柱子行清洗。清洗應定期進行,如果在短期內分析許多樣品,則以每日清洗一次為宜,至少也應一周一次,防止有太多的雜質在柱上堆積。
反相柱的常規洗滌辦法是:分別取甲醇、三氯甲烷、甲醇-水各20倍柱體積(既對于一根4.6mmX25cm的柱來說,通常是50-60ml,而對于9.4mm內經X50cm的柱來說,通常是500-600ml) ,使之通過柱子。然后用流動相平衡(通常仍用20倍柱體積),柱一般將恢復正常。如果選擇性仍和以前不一樣,則表明還有其他雜質留在柱子里,這時應考慮更加嚴格的清洗:先用20倍柱體積的水,再用相同體積0.05mol/L硫酸,*后用流動相溶劑。酸洗常能洗下有機溶劑所不能洗下的剩余雜質。在低pH值下做長期(**或更長)清洗是不適宜的,但50ml洗液以2ml/min的速度清洗25min,一般對健合相沒有損害。注意,強堿不能用來清洗任何微粒硅膠柱(不論是健合相還是非健合相),因為硅膠骨架會溶解。對于嚴重污染的反相柱,只能采用再生的方法。
2.柱頭空隙的處理
拆下不銹鋼燒結過濾器后,檢查柱床,常可見柱頭塌陷,此時先剔掉無規則床層和帶色填料,使柱床呈白色并完全水平,再使甲醇作糊狀填料勻漿液,將填料勻漿液滴在柱上靠重力從勻漿液中排出甲醇液,重復數次,直到水平,完成了柱的再生。此時,如果柱頭孔隙深度小于1cm,可以采用下述局部重裝的辦法,否則,柱應當完全重裝或更換。
柱入口局部重裝時采用的填料可以和原填料一樣,也可以用玻璃珠。粒徑大于20um的可用敲打充填法干裝。如果粒徑小于20um則要用合適的溶劑配成勻漿,勻漿逐次加入,每次加入前都要使上一次加入的全部沉降。把孔隙填滿后,用刮刀將填料刮平,更換柱入口接頭,把柱重新接到液相儀器上,慢慢地增加流動相流速和系統壓力,直到操作上限為止。讓相當于10-20 倍柱體積的流動相通過柱子,然后逐漸降低流速,并使壓力降為零,再把柱子卸下來,并卸下入口接頭,觀察柱的入口。此時孔隙應當減小,但是由于新加入的填料在系統的操作壓力下壓入柱頭,孔隙不可能一次就被全部充滿。
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