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液相色譜柱的使用和配制

作者:宋檢 時間:2022-10-26 來源:互聯網

液相色譜儀由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分組成,其中液相色譜柱的正確安裝和使用,是液相色譜工作的關鍵;也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實驗數據的必經之路。

1 液相色譜柱的使用

色譜柱在使用前,*好進行柱的性能測試,并將結果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能 可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中 的條件進行(出廠測試所使用的條件是*佳條件),只有這樣,測得的結果才有可比性。

樣品的前處理:

(a)*好使用流動相溶解樣品。

(b)使用予處理柱除去樣品中的強*性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質。

(c)使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質。

2 流動相的配制

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:

(a)流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。

(b)流動相具有一定惰性,與樣品不產生化學反應(特殊情況除外)。

(c)流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

3流動相流速的選擇

因柱效是柱中流動相線性流速的函數,使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求* 佳柱效,*好使用*佳流速。對內徑為4.6 m的色譜柱,流速一般選擇1 mL/min,對于內徑為4.0 mm柱,流速 0.8 mL/min為佳。當選用*佳流速時,分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時,可適當增加甲醇或乙腈的含量)。

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