作者:宋檢 時間:2022-10-31 來源:互聯網
組蛋白修飾的研究方法細胞裂解通過免疫印跡來檢測組蛋白修飾時可以用經SDS Laemmli樣品緩沖液提取得到的全細胞裂解液。對于動物細胞株而言,離心得到的細胞可以直接在樣品緩沖液中重懸并煮過后上樣;然而需要注意的是,一些實驗方案中還會推薦在提取步驟后對樣品進行超聲處理。除了堿性預處理步驟是可選的以外,真菌蛋白提取物可以用同樣的方式來進行準備。
然而,如果實驗上必須盡量減少樣品處理時間的話該步驟是可以省略的。只要注明該步驟的省略以及后續實驗樣品均以同樣方式處理即可。提取之后再通過離心除去樣品中的不溶性組分,將可溶性的全細胞提取物留在上清中。
組蛋白富集在一些實際應用中,有必要檢測富集有組蛋白的組分或純化的組蛋白;富集的樣品可以是分離得到的細胞核或者是染色質的粗提取物。從后生動物細胞或者酵母中提取細胞核十分簡單,基本上只需要三個步驟:低滲膨脹(酵母要先將細胞壁消化掉以后)、利用機械力剪切進行細胞膜裂解(例如用杜恩斯勻漿器進行破碎或者在旋渦混合器上溫和震蕩)和通過離心分離細胞核。
染色質粗分離也是很簡單的,只要在去垢劑裂解步驟后用離心將染色質沉淀即可。組蛋白純化一些現有的組蛋白純化實驗方案是相當好的,并且易于遵循 [18]。在這里介紹的方法中,組蛋白是使用稀硫酸溶液從細胞核中提取的,然后通過柱層析純化。此方法的優點在于核酸和許多非組蛋白由于在酸性pH值下是不溶的,可以很容易地通過離心來去除掉。可溶的含有組蛋白的組分就可以用 三氯乙酸(TCA)來沉淀,并且如果需要的話,可以通過一個反相高效液相色譜柱的方法來純化。這樣提取出來的組蛋白,可用于多種應用,包括免疫印跡和質譜。
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