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高效液相色譜儀故障排除及檢定技巧

作者:宋檢 時間:2022-11-08 來源:互聯網

高效液相色譜系統的許多問題都能在譜圖上反映出來,一些問題可通過改變設備參數解決,一些問題必須通過修改操作程序解決,而正確選擇色譜柱和流動相是得到好的色譜圖的關鍵。

一、常見故障及排除

1.基線漂移偏大

(1)柱溫波動:控制好柱子和流動相的溫度。

(2)流通池被污染或有氣泡:用甲醇或其他強*性溶劑沖洗流通池。

(3)檢測器出現阻塞,高壓造成流通池窗口破裂,產生噪音基線:取出阻塞物或更換管子,更換流通池窗需參考檢測器手冊。

(4)柱平衡慢:特別是流動相發生變化時,用中等強度的溶劑沖洗,提前預約客戶,在分析前用10~20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。

(5)流動相污染、變質或由低純度溶液配成:使用高品質的化學試劑及高效液相色譜(HPLC)級的溶劑。

(6)樣品中有強保留的物質(高K′值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現出一個逐步升高的基線:使用保護柱,如有必要,在進樣之間或在分析過程中,用強溶劑沖洗柱子。

(7)流動相不均勻、配比不當或流速有變化:在配制流動相時應充分搖勻,同時要根據目標分離物和流動相的*性合理配比,并保持流速恒定。

(8)柱子平衡時間短:HPLC色譜柱根據使用環境不同,平衡時間通常要控制在(30~60)min。

(9)檢測器沒有設定在*大吸收波長處:檢測器沒有設定在*大吸收波長處不僅影響檢測器的靈敏度和結果的準確度,還會使基線漂移加大,應該將檢測器設定在*大吸收波長處。

2.噪聲偏大

(1)在流動相、檢測器或泵中有空氣:流動相脫氣,并沖洗系統以除去檢測器或泵中的空氣。

(2)管路漏液:檢查管路接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。

(3)流動相污染、變質或有低純度溶液配制:使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑。

(4)溫度差異影響(柱溫過高,檢測器未加熱):減少差異或加上熱交換器。

(5)在同一條線上有其他電子設備:斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正。

(6)檢測器/ 記錄儀電子元件的問題:斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正。

(7)泵震動:在系統中加入脈沖阻尼器。

(8)檢測器燈能量不足:更換燈。

(9)色譜柱填料流失或阻塞:更換色譜柱。

3.重復性偏大

(1)峰型不佳(如峰拖尾、峰寬較大、分裂峰等都不利于峰面積的計算,造成重復性偏大):可以改變色譜柱條件,改變溫度、流速等參數,以獲得較尖銳的峰型,利于保證積分的準確性。

(2)泵流速不穩:可以根據泵流速檢定情況作出判斷,泵流速的穩定性對峰面積的重復性影響非常大。例如:在其他條件不變的情況下,將流速由1.0mL/min改為0.5mL/min,結果保留時間加倍,峰面積也加倍,也可以看出峰面積在一定條件下基本與流速成反比。

(3)色譜柱影響:色譜柱固定相的流失,以及色譜柱對標樣的吸收等都會影響檢測結果;特殊情況下還會發生柱子對樣品的不可逆吸收,建議使用替代柱。

(4)柱溫有變化:柱溫對保留時間有顯著影響,保留時間的變化直接影響積分面積的大小。因此應保持柱溫恒定。

(5)進樣器漏液:進樣器漏液導致進入色譜柱的樣品量發生變化,進而導致峰面積發生變化,應檢查進樣墊等易損部件以排除漏液。

(6)樣品本身的影響:樣品降解或溶劑揮發都會導致重復性偏大,應確定方法的準確性和采取措施控制揮發。

二、液相色譜儀的檢定技巧

在檢定中,有可能工作量比較大,時間比較長。如進一次樣,等待樣品出峰可能需要10min以上,而按照檢定規程要求,至少要進6次樣,如此一項做下來,可能就需要一兩個小時。這就要求檢定人員必須提高工作效率,合理安排工作時間。如在檢定員下廠前*好預約客戶,通知其預熱儀器,有的還需要預先沖洗色譜柱,因為根據企業檢測樣品不同,儀器色譜柱內往往殘留各種雜質,給檢定帶來不確定因素。如果到了現場再沖洗,更換流動相,等儀器穩定下來,有可能要半天的時間。這里提供兩個檢定技巧供參考。

一是自備替代柱(*好選用符合規程、對標物保留時間較短的色譜柱)。

二是連續進樣。對于連續進樣,出于定性分析的要求,還應當配備一個秒表,記錄并計算各次進樣的保留時間(操作方法:**要選用可以連續記錄6次以上的秒表,在**次進樣時,便用秒表與工作站同步計時,然后記錄各個后續進樣的時間,再與工作站出峰時間依次對應,計算保留時間)。但是,一定要保證計時準確,否則會影響定性重復性指標的判斷。

作者:魏惠萍

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