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使用“甲醛法”測定粗蛋白

作者:宋檢 時間:2022-11-10 來源:互聯網

為快速了解生產情況和產品質量情況,比較了大量的蛋白質測定法,現將甲醛法介紹給大家,供參考。

一、樣品的制備

在生產線隨機采集樣品(我公司生產的是玉米蛋白粉,不需粉碎;如果是豆粕顆粒較大的飼料,需粉碎后全部通過40目篩),分別采用四分法將檢樣縮至500g,裝于密閉容器中,防止試樣成分變化或變質。

二、原理

將試樣置于三角瓶中,加過氧化氫、濃硫酸,加熱。在有機物分解時,蛋白質及有機氮化合物中的氮形成銨鹽,甲醛與銨鹽可發生絡合反應生成六次甲基四胺〔(CH2)6N4〕,在反應中同時生成等量的硫酸,用堿液直接滴定,將結果乘以換算系數6.25,計算出粗蛋白的含量。

反應機理如下:

2NH2(CH2)2COOH+H2SO4+12H2O2=(NH4)2SO4+6CO2+16H2O (1)

2(NH4)2SO4+6HCHO=(CH2)6N4+2H2SO4+6H2O (2)

三、儀器和試劑

(1)150mL三角燒瓶

(2)(1000~2000)W可調電爐

(3)氫氧化鈉標準溶液:c(NaOH)=0.05mol/L

(4)氫氧化鈉溶液:c(NaOH)=0.1mol/L

(5)4mol/L硫酸溶液

(6)40%的氫氧化鈉溶液

(7)1:1甲醛-乙醇溶液

(8)0.2%甲基紅指示液

(9)1%酚酞指示液

四、試驗步驟

稱取試樣(0.5~1)g準確至0.0001g,放入三角燒瓶中,加入2mL濃硫酸、10mL過氧化氫,先用低溫加熱消化至泡沫消失,再加大功率,直至瓶中白煙基本趕盡,取下三角瓶冷卻至室溫,加蒸餾水50mL搖勻,再加0.2%甲基紅指示液2~3滴,用40%氫氧化鈉溶液調至溶液顯黃色,立即用4mol/L硫酸溶液滴加至紅色,然后放在電爐上煮沸(1~2)min,取下加蓋,冷卻至室溫,用0.1mol/L氫氧化鈉溶液中和至溶液紅色消失,加10mL的1:1甲醛-乙醇溶液(預先用酚酞為指示劑,用0.1mol/L氫氧化鈉溶液中和至溶液顯粉紅色,pH=8.3),酚酞指示劑2~3滴,搖勻后靜止1min,使之反應完全,然后用0.05mol/L氫氧化鈉標準溶液滴定至溶液顯粉紅色,即為終點。記下消耗的氫氧化鈉標準溶液的毫升數。

五、計算

式中:V——消耗氫氧化鈉標準溶液的毫升數;c——氫氧化鈉標準溶液濃度;M——樣品質量,g;X0——樣品的水分,%。

六、甲醛法與國標法測玉米蛋白飼料中粗蛋白的測定結果比較(見表1)

表1 測定結果比較

七、結束語

此方法在檢驗數據上與國標相比,相對偏差低于0.5%,但在檢測時間上甲醛法做完一個樣僅需(0.5~1)h,但國標法僅消化就需要2h以上,再加上蒸餾半小時、滴定等操作,需要(3~4)h。在生產過程中使用甲醛法進行產品判定,節省了時間,一旦產品質量出現異常就可立即作出糾正處理,節約返工造成的浪費。另外,在節能和廢液處理上,因為甲醛法消化時間較短,節約了(2~3)kW·h的用電。因為不需要蒸餾,用的濃硫酸和氫氧化鈉比國標法少,產生的廢液也少,減少了環境污染。

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