作者:百檢網(wǎng) 時(shí)間:2021-11-23 來源:互聯(lián)網(wǎng)
1988年全球首例轉(zhuǎn)基因作物耐草甘膦品系轉(zhuǎn)基因大豆誕生后,轉(zhuǎn)基因作物迅猛發(fā)展,給人類帶來了巨大的福利。作為近代人類*為驕傲的一項(xiàng)技術(shù)發(fā)明,轉(zhuǎn)基因技術(shù)帶來的轉(zhuǎn)基因食品*大滿足了人們的物質(zhì)生活需求,但隨之而來的安全問題也引起了人們的高度關(guān)注。食品轉(zhuǎn)基因成分分析檢測屬于轉(zhuǎn)基因食品標(biāo)識和監(jiān)管的重要環(huán)節(jié),本文主要對當(dāng)前常用的轉(zhuǎn)基因食品分析檢測技術(shù)進(jìn)行綜述,以供參考。
組學(xué)分析技術(shù)
組學(xué)分析技術(shù)是對一類個體系統(tǒng)集合的分析技術(shù),涉及到蛋白組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、代謝組學(xué)等技術(shù)。蛋白組學(xué)是在特定的時(shí)間與環(huán)境下,對一個細(xì)胞內(nèi)的所有蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行研究的技術(shù)。其研究重點(diǎn)是某個細(xì)胞或生物在特定生理與病理?xiàng)l件下的蛋白質(zhì),了解蛋白質(zhì)的數(shù)量、功能和特點(diǎn)。轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的是細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下表達(dá)的所有基因的總和,了解外源基因表達(dá)的信息與外源基因插入受體中的表達(dá)狀況。代謝組學(xué)主要研究的是在特點(diǎn)的時(shí)間與條件下細(xì)胞中全部小分子代謝物質(zhì)。作為一項(xiàng)新興技術(shù),組學(xué)分析技術(shù)主要用于評價(jià)樣品的非期望效應(yīng),進(jìn)而對轉(zhuǎn)基因食品的危害進(jìn)行正確識別。該技術(shù)具有通量高、無選擇性、客觀等優(yōu)點(diǎn),已在
光譜學(xué)分析技術(shù)
近紅外光譜技術(shù)具有穿透力強(qiáng)等特點(diǎn),無需對檢測樣品進(jìn)行基因組提取或預(yù)處理,是轉(zhuǎn)基因光譜學(xué)技術(shù)中的主要技術(shù)。雖然對轉(zhuǎn)基因食品光譜學(xué)檢測的準(zhǔn)確性還無法確定,但該檢測技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于簡單快速、無損失。由于消費(fèi)者十分重視轉(zhuǎn)基因食品的安全問題,因此,組學(xué)分析與光譜學(xué)技術(shù)都將關(guān)注焦點(diǎn)放在轉(zhuǎn)基因食品的非期望效應(yīng)上。
蛋白質(zhì)印跡法
蛋白質(zhì)印跡法是讓靶蛋白特異性的非標(biāo)記性抗體與靶蛋白中的相關(guān)抗原決定簇結(jié)合在一起,再檢測已結(jié)合上去的抗體。由于研究難度系數(shù)較高,且受環(huán)境制約因素較多,成本較高,不適用于大量的
ELISA檢測法
ELISA的原理是讓待測樣品中的目標(biāo)蛋白與固相載體表面的相關(guān)抗體發(fā)生反應(yīng),加入酶反應(yīng)的相關(guān)底物后,底物被催化為有色物質(zhì),通過顯色反應(yīng)檢測是否有轉(zhuǎn)基因成分。該方法具有操作簡單、快速等優(yōu)點(diǎn),適用于現(xiàn)場檢測,但存在3個問題:一是無合適的用于定量的內(nèi)標(biāo)蛋白,因此無法進(jìn)行精確定量分析。二是復(fù)雜基質(zhì)*易影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。三是只適用于未加工過的原材料。
免疫試紙條法
該檢測法與蛋白質(zhì)印跡法的主要區(qū)別在于它是用硝化纖維作為固相載體,而不是聚苯乙烯反應(yīng)板。該檢測法的顯著優(yōu)勢是在短時(shí)間內(nèi)能獲得檢測結(jié)果,一般只需5~10 min。因此,適用于某些緊急情況下的檢測。但值得注意的是該法的靈敏度與精準(zhǔn)度都不高,且只能從整體角度對蛋白質(zhì)進(jìn)行分析,對檢測樣品本身的成分與質(zhì)量等檢測還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。因此,筆者認(rèn)為該法不適合用于轉(zhuǎn)基因食品的檢測檢驗(yàn)。
PCR檢測法
該技術(shù)的檢測原理是對目標(biāo)序列進(jìn)行擴(kuò)增,再通過相應(yīng)的方法來檢測擴(kuò)增產(chǎn)物。它包括定性PCR、復(fù)合定性PCR、競爭性定量PCR、PCR-ELISA。
定性PCR
對特異的DN**段進(jìn)行PCR擴(kuò)增,再利用瓊脂糖凝膠電泳分離擴(kuò)增產(chǎn)物。然后,借助凝膠成像系統(tǒng)觀察分離情況。此法具有*高的靈敏度。
復(fù)合定性PCR
將至少2對的引物置入PCR檢測系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)增處理。
競爭性定量PCR
將已知濃度的內(nèi)標(biāo)DNA與濃度未知的待測DNA放在一個反應(yīng)管中,再進(jìn)行PCR擴(kuò)增,利用瓊脂糖凝膠電泳將產(chǎn)物進(jìn)行分離。通過對電泳生成的分離產(chǎn)物中的內(nèi)標(biāo)DNA與待測DNA的產(chǎn)物條帶密度作線性回歸分析以獲得兩種DNA的濃度等值點(diǎn),即可對待測DNA濃度進(jìn)行定量分析。此法操作非常繁瑣,但檢測結(jié)果精準(zhǔn)性較高。
PCR-ELISA
選取含有地高辛、生物素標(biāo)記的相關(guān)引物,將其置入PCR反應(yīng)系統(tǒng)內(nèi),對目標(biāo)DNA序列進(jìn)行擴(kuò)增。將PCR產(chǎn)生物與固相板上的一些特異性探針進(jìn)行結(jié)合,然后加入抗地高辛,底物會發(fā)生顯色反應(yīng)。通過酶標(biāo)儀得到相應(yīng)的吸光值,然后加入標(biāo)樣,繪制出對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)曲線進(jìn)行半定量分析。
新材料輔助的定量檢測技術(shù)
目前,納米技術(shù)也被廣泛應(yīng)用于目的產(chǎn)物的檢測中,以減少背景值并提高檢測準(zhǔn)確度。當(dāng)前常用的新材料有納米金粒子、氧化石墨烯、量子點(diǎn)。利用這些材料的熒光反應(yīng)來進(jìn)行定量檢測,尚處于研究階段,但應(yīng)會有較好的應(yīng)用前景。
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