透皮試驗(yàn)是評(píng)價(jià)很多膏劑、乳膏、凝膠、半固體藥品、化妝品的安全性和有效性的手段之一。透皮試驗(yàn)的基本原理就是采用動(dòng)物、人或人造的離體皮膚，結(jié)合特定的分析方法，通過(guò)動(dòng)態(tài)測(cè)量給藥一定時(shí)間內(nèi)透過(guò)吸收皮膚的劑量和透過(guò)速率，以此來(lái)考察試驗(yàn)樣品的皮膚滲透行為。由于該試驗(yàn)屬于國(guó)家藥監(jiān)局評(píng)審中心要求提交的相關(guān)資料之一，所以很多相關(guān)產(chǎn)品的功效評(píng)價(jià)需要做這個(gè)試驗(yàn)。
　　實(shí)驗(yàn)用皮膚簡(jiǎn)述
　　影響透皮吸收試驗(yàn)結(jié)果的因素有很多，比如選擇試驗(yàn)的皮膚及來(lái)源、處理和貯存，接收介質(zhì)的種類、pH值和體積，以及研究人員的實(shí)際操作等，這些都可能導(dǎo)致各擴(kuò)散池間、操作者間及實(shí)驗(yàn)室間重現(xiàn)性差，進(jìn)而引起試驗(yàn)結(jié)果不可靠。這其中，試驗(yàn)用皮膚無(wú)疑是影響透皮吸收試驗(yàn)*關(guān)鍵的部分，它從大類上可以分為離體人類皮膚、人造皮膚、動(dòng)物皮膚三種，國(guó)外FDA（美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局）和EMA（歐洲藥品監(jiān)督管理局）均推薦使用離體人類皮膚進(jìn)行試驗(yàn)。
　　不過(guò)EMA部分法規(guī)也指出在無(wú)法獲得人皮的情況下可使用動(dòng)物皮膚代替，如豬、豚鼠或其他嚙齒類動(dòng)物的皮膚。但對(duì)于發(fā)揮局部作用的皮膚用制劑，則僅推薦使用離體人類皮膚作為透皮吸收研究的皮膚模型。中國(guó)由于目前沒(méi)有相關(guān)法律法規(guī)進(jìn)行明確規(guī)定，而且試驗(yàn)機(jī)構(gòu)也沒(méi)有正規(guī)渠道獲取規(guī)范的人類皮膚進(jìn)行試驗(yàn)，所以研究人員多采用大鼠、小鼠或豬的皮膚。目前，部分廠家也開(kāi)始嘗試生產(chǎn)人造皮膚，但是由于沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)，質(zhì)量參差不齊。
　　人類皮膚介紹
　　通常，與年齡較大(>60歲)供體的皮膚相比，年輕(20～40歲)供體皮膚的含水量更高、角質(zhì)層角化細(xì)胞更小，故而親水性藥物應(yīng)用于年輕供體皮膚上時(shí)具有較高的皮膚透過(guò)性。另外，人體不同部位皮膚的厚度和毛囊分布存在差異，這可能導(dǎo)致透皮吸收試驗(yàn)結(jié)果的差異。研究表明，在局部皮膚應(yīng)用咖啡因時(shí)，有毛囊皮膚的吸收速率較無(wú)毛囊皮膚高10倍。因此，應(yīng)用人類皮膚進(jìn)行透皮吸收研究時(shí)，*好選擇同一解剖學(xué)部位。
　　對(duì)于來(lái)源于同一部位的皮膚樣本也需仔細(xì)評(píng)估其特征，避免使用存在皮膚疾病或其他存在紋身、妊娠紋、疤痕等可能影響皮膚滲透性的皮膚。在各國(guó)藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)試驗(yàn)皮膚的要求中，僅FDA提到皮膚的厚度應(yīng)控制在(500±250)?m。使用較厚(500～1000?m)的皮膚可能會(huì)影響透皮吸收試驗(yàn)結(jié)果，尤其是對(duì)于一些脂溶性較強(qiáng)的藥物。在正常的生理?xiàng)l件下，真皮層內(nèi)存在的毛細(xì)血管會(huì)將透過(guò)皮膚的藥物帶入體循環(huán)，而離體皮膚缺乏微循環(huán)，因此親脂性藥物會(huì)在真皮層中形成藥物儲(chǔ)庫(kù)，成為一個(gè)物理屏障，阻礙藥物向接收介質(zhì)中擴(kuò)散。
　　動(dòng)物皮膚介紹
　　各種動(dòng)物皮膚已被用作人類皮膚的替代品來(lái)評(píng)藥物的經(jīng)皮滲透特征，包括豬、小鼠、大鼠、豚鼠、蛇及靈長(zhǎng)類動(dòng)物。由于醫(yī)學(xué)倫理和法規(guī)的要求，靈長(zhǎng)類動(dòng)物皮膚的使用受限。
　　1.豬皮
　　豬皮與人類皮膚*相似，如角質(zhì)層厚度、真皮層中的膠原纖維排列、糖脂及神經(jīng)酰胺含量、毛囊密度等。然而，豬皮的血管較少，皮膚上的汗腺多為大汗腺，而人類皮膚上多為小汗腺。但是，大量試驗(yàn)也表明在這些不同的動(dòng)物皮膚中，豬皮膚的滲透性與人體皮膚*為接近，因此很多透皮吸收試驗(yàn)都推薦采用巴馬香豬的離體豬皮來(lái)進(jìn)行試驗(yàn)。
　　2.嚙齒類動(dòng)物皮膚
　　嚙齒類動(dòng)物包括小鼠、大鼠和豚鼠的皮膚，與人類皮膚在角質(zhì)層厚度、角質(zhì)細(xì)胞層數(shù)、毛囊密度、含水量、脂質(zhì)分布和形態(tài)等方面存在差異，且滲透性更高。大鼠皮膚較小鼠皮膚更適合用于滲透性研究，但仍普遍比人類皮膚具有更強(qiáng)的滲透性。較高的毛囊密度是嚙齒類動(dòng)物皮膚應(yīng)用時(shí)的一個(gè)主要缺點(diǎn)，使用前必須去除毛發(fā)，此過(guò)程易損傷皮膚。無(wú)毛的嚙齒類動(dòng)物能更好地模擬人體皮膚的滲透性，有研究表明無(wú)毛豚鼠皮膚是研究人類皮膚吸收的良好替代品。
　　人造皮膚介紹
　　人造皮膚不存在倫理、個(gè)體差異、處理困難等問(wèn)題，具有可工業(yè)化生產(chǎn)、品質(zhì)易控制等優(yōu)點(diǎn)，可解決試驗(yàn)重復(fù)性問(wèn)題。但研究表明，市售的大部分人造皮膚無(wú)法完全模擬生物皮膚的屏障功能。人造皮膚滲透性較強(qiáng)，對(duì)不同制劑的區(qū)分度弱，目前有研究把人工合成膜用于化妝品的刺激性評(píng)估，但大規(guī)模廣泛用于藥物的透皮吸收還沒(méi)有普及。
　　以上便是各種透皮吸收試驗(yàn)用皮膚的優(yōu)缺點(diǎn)介紹。考慮到該生物科技公司的軟膏劑是要申報(bào)生產(chǎn)，而國(guó)家藥監(jiān)局評(píng)審中心一般就是考察處方設(shè)計(jì)的合理性，重點(diǎn)關(guān)注的是透皮量、皮膚殘留量及皮膚表面剩余量，計(jì)算總體回收率。采用豬皮作為試驗(yàn)用皮膚的操作已經(jīng)*為成熟。因此我們*終還是推薦采用巴拿馬小香豬皮。
　　至于豬皮難打碎的問(wèn)題，我們給出的方案是在透皮試驗(yàn)結(jié)束后刮下皮膚上剩余乳膏至燒杯中備用。取皮膚沖洗、剪碎，再加適量溶劑，用超細(xì)勻漿機(jī)將皮膚打磨至乳狀，加溶劑，混勻，離心，取上清液過(guò)濾后作為供試品溶液，測(cè)定皮膚殘留量。皮膚表面剩余量就很簡(jiǎn)單了，把刮下來(lái)的乳膏直接做樣測(cè)含量就行。