服務(wù)介紹

　　大量的研究表明線粒體與細胞凋亡密切相關(guān)，其中線粒體跨膜電位(MMP)的下降，被認為是細胞凋亡級聯(lián)反應(yīng)過程中早發(fā)生的事件之一。它發(fā)生在細胞核凋亡特征(染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂)出現(xiàn)之前,一旦線粒體跨膜電位崩潰，則細胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。

　　二、實驗原理

　　JC-1是一種碳氰化合物類陽離子熒光染料，可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1在細胞內(nèi)以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在，分別處于不同的熒光發(fā)射峰。當(dāng)JC-1 濃度低或膜電位水平低時，主要以單體形式存在，激發(fā)波長為527nm，呈綠色熒光;當(dāng)JC-1濃度升高或線粒體膜電位水平較高時，形成聚合物，發(fā)出紅色的熒光，激發(fā)波長為590nm。當(dāng)細胞發(fā)生凋亡時，線粒體跨膜電位被去*化，JC-1從線粒體內(nèi)釋放，紅光強度減弱，以單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光，根椐這一特征就可以檢測線粒體膜電位的變化。

　　三、實驗流程

　　1. 細胞培養(yǎng);

　　2. 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細胞凋亡，同時設(shè)立陰性依照組合陽性對照組，收集細胞;

　　3. 用PBS洗滌細胞三次，收集不多于1106的細胞;

　　4. 取100 μL 10譏ncubation Buffer加900μL滅菌去離子水稀釋成1譏ncubation Buffer，混勻并預(yù)熱至37℃;

　　5. 吸取500 μL 1譏ncubation Buffer，加入1μL JC-1，渦旋混勻配成JC-1工作液;

　　6. 取500 μL JC-1工作液將細胞均勻懸浮，37℃，5% CO2的培養(yǎng)箱中孵育15~20min。

　　7. 室溫離心(2000rpm,5min)收集細胞，用1譏ncubation Buffer洗兩次;

　　8. 吸取500 μL 10譏ncubation Buffer重新懸浮細胞;

　　9. 流式細胞儀檢測，分析。

　　四、客戶提供

　　細胞株(凍存株或培養(yǎng)好的細胞)，相關(guān)藥品或MMP檢測試劑盒(可代購)!

　　五、公司提供

　　實驗步驟、結(jié)果圖、數(shù)據(jù)結(jié)果和分析報告

　　實驗周期：1-2周，具體需要根據(jù)細胞生長情況及實驗內(nèi)容而定。