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遺傳毒性

作者:百檢網 时间:2021-10-21 来源:互联网

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?ISO 10993-3, GB/T 16886.3 ?OCED471, OECD473, OECD474, OECD476

?Ames實驗:中文名稱:鼠傷寒沙門氏菌回復突變試驗.


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?實驗目的和原料:
?鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)的組氨酸營養缺陷型(his-)菌株,在含微量組氨酸的培養基中,除*少數自發回復突變的細胞外,一般只能分裂幾次,形成在顯微鏡下才能見到的微菌落。受誘變劑作用后,大量細胞發生回復突變,自行合成組氨酸,發育成肉眼可見的菌落。某些化學物質需經代謝活化才有致變作用,在測試系統中加入哺乳動物微粒體酶,可彌補體外試驗缺乏代謝活化系統之不足。
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?哺乳動物細胞體外基因突變試驗
?實驗目的和原理:
?TK基因的產物胸苷激酶在體內催化從脫氧胸苷(TdR)生成胸苷酸(TMP)的反應。在正常情況下,此反應并非生命所必需,原因是體內的TMP主要來自于脫氧尿嘧啶核苷酸(dUMP),即由胸苷酸合成酶催化的dUMP甲基化反應生成TMP。但如在細胞培養物中加入胸苷類似物(如三氟胸苷,即TFT——trifluorothymidine),則TFT在胸苷激酶的催化下可生成三氟胸苷酸,進而摻入DNA,造成致死性突變,故細胞不能存活。若TK基因發生突變,導致胸苷激酶缺陷,則TFT不能磷酸化,亦不能摻入DNA,故細胞在含有TFT的培養基中能夠生長,即表現出對TFT的抗性。根據突變集落形成數,計算突變頻率,以判定受試物的致突變性。

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?哺乳動物細胞體外染色體畸變試驗
?實驗目的和原理:
?染色體畸變分為染色體結構畸變和數目畸變,染色體結構畸變又分為缺失、短片、互換等。
?在加入和不加入代謝活化系統的條件下,使培養的哺乳動物細胞暴露于受試物中,用中期分裂相阻斷劑(如秋水仙素或秋水仙堿)處理,使細胞停止在中期分裂相,隨后收獲細胞,制片,染色,分析染色體畸變。

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?小鼠骨髓細胞微核實驗
?實驗目的和原理:
?微核是在細胞的有絲分裂后期染色體有規律地進入子細胞形成細胞核時,仍然留在細胞質中的染色單體或染色體的無著絲粒片段或環。它在末期以后,單獨形成一個或幾個規則的次核,被包含在細胞的胞質內而形成,由于比核小得多,故稱微核。
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