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純化水是一種用于產品生產的原輔料及清潔用水，深刻影響著產品的質量問題，純化水微生物限度檢查是確保純化水質量問題的重要環節之一，應按照《中國藥典》2020年二版純化水微生物限度檢查的要求，進行檢查，具體流程如下。

純化水微生物限度檢查：**步
菌液的制備：
取銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌工作用菌種挑取少量培養物接種至10ml 胰酪大豆胨液體培養基中，30~35℃培養18~24小時。取該新鮮培養液1ml加入至0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍梯度稀釋至10^-5~10^-8，制成每1ml含菌數不大于100cfu的菌懸液。

純化水微生物限度檢查：第二步
供試液的制備：
供試品：純化水
沖洗液：pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液
1）試驗組：吸取1ml供試液注入濾杯中，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml進行過濾沖洗，分別在沖洗液中加入上述2種菌液各1ml過濾，濾干后，將薄膜用鑷子夾到已凝固的R2A瓊脂培養基上，平行制備2個平皿。在30~35℃培養5天，觀察結果，測定所加入的試驗菌數。
2）供試品對照組：取供試液1ml，以稀釋液代替菌液同試驗組操作。每個樣品各制備2個平皿。在30～35℃培養5天，觀察結果，測定供試品的菌數。
3）菌液對照組：取不含中和劑及滅活劑的相應稀釋液替代供試液，按試驗組操作加入試驗菌液平行制備2個平皿。在30~35℃培養5天，觀察結果，測定其菌數。
4）稀釋劑對照組：取100ml pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液注入濾杯，加入上述2種菌液各1ml進行過濾，濾干后，將薄膜用鑷子夾到已凝固的R2A瓊脂培養基上。平行制備2個平皿。在30~35℃培養5天，觀察結果，測定其菌數。

純化水微生物限度檢查：第三步
試驗結果分析：
1）計數方法適用性試驗進行3次獨立平行試驗(分別使用不同取樣點的純化水)，并分別計算各試驗菌每次回收試驗的比值，應在50%~200%范圍內。
2）試驗組菌數回收率（%）=試驗組的平均菌數-供試品對照組的平均菌數/菌液對照組的平均菌數×****
3）稀釋劑對照組回收率（%）=稀釋劑對照組的平均菌數/菌液對照組的平均菌數×****

純化水微生物限度檢查：第四步
偏差處理情況：
驗證的數據產生的任何偏差，應及時進行偏差調查，按照《偏差管理規程》進行處理并如實記錄，給出合理的偏差處理措施，并上報驗證領導小組，記錄備案，并且根據處理措施進行相應的處理，并對處理的過程、結果進行記錄與跟蹤。
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