1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中肌醇的測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中肌醇的測定。

2.規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件,其*新版本(包括所有的修改單)適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

**法 微生物法

3.原理

利用葡萄汁酵母菌(Saccharomν ces varun)對(duì)肌醇的特異性和靈敏性,定量測定出試樣中待測物質(zhì)的含量。在含有除待測物質(zhì)以外所有營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基中,微生物的生長與待測物質(zhì)含量呈線性關(guān)系,根據(jù)透光率與標(biāo)準(zhǔn)工作曲線進(jìn)行比較,即可計(jì)算出試樣中待測物質(zhì)的含量。

4.試劑和材料

除非另有規(guī)定,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的二級(jí)水。

4.1 菌株:葡萄汁酵母菌( Saccharomyces uvarum),ATCC 9080。

4.2 肌醇(myo-Inositol)標(biāo)準(zhǔn)品:分子式C6H12O6,純度≥99%。

4.3 氯化鈉(NaCl)。

4.4 氫氧化鈉(NaOH)。

4.5 培養(yǎng)基

4.5.1 麥芽浸粉瓊脂培養(yǎng)基(Malt Extract Agar):參見附錄A。

4.5.2 肌醇測定培養(yǎng)基:參見附錄A。

4.6 氯化鈉溶液(9g/L):稱取9.0g氯化鈉溶解于1000mL水中,分裝試管,每管10mL。121℃滅菌15min。

4.7 鹽酸(1mol/L):量取82.0mL鹽酸溶于水中,冷卻后定容至1000mL。

4.8 鹽酸(0.44mol/L):量取36.6mL鹽酸溶于水中,冷卻后定容至1000mL。

4.9 氫氧化鈉溶液(600g/L):稱取300g氫氧化鈉溶解于水中,冷卻后定容至500mL。

4.10 氫氧化鈉溶液(1mol/L):稱取40g氫氧化鈉溶解于水中,冷卻后定容至1000mL

4.11 肌醇標(biāo)準(zhǔn)溶液

4.11.1 肌醇標(biāo)準(zhǔn)貯備液(0.2mg/mL):肌醇標(biāo)準(zhǔn)品置于裝有五氧化二磷的干燥器中干燥24h以上,稱取50mg肌醇標(biāo)準(zhǔn)品(4.2)(精確到0.1mg),用水充分溶解,定容至250mL,貯存于冰箱中。

4.11.2 肌醇標(biāo)準(zhǔn)中間液(10μg/mL):吸取5mL肌醇標(biāo)準(zhǔn)貯備液(4.11.1)用水定容到100mL,貯存于冰箱。

4.11.3 肌醇標(biāo)準(zhǔn)工作液(1μg/mL和2μg/mL):吸取10mL肌醇標(biāo)準(zhǔn)中間液(4.11.2)兩次,分別用水定容到100mL和50mL。該工作液需每次臨用前配制。

4.12 干燥劑:五氧化二磷(P2O5)。

4.13 玻璃珠:直徑約5mm。

5.儀器和設(shè)備

除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下:

5.1 天平:感量為0.1mg。

5.2 pH計(jì):精度≤0.02。

5.3 分光光度計(jì)。

5.4 渦旋混合器。

5.5 離心機(jī):轉(zhuǎn)速≥2000轉(zhuǎn)/分鐘。

5.6 恒溫培養(yǎng)箱:30℃±1℃。

5.7 振蕩培養(yǎng)箱:30℃±1℃,振蕩速度140次/min～160次/min。

5.8 冰箱:2℃～5℃。

5.9 無菌吸管:10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器或吸頭。

5.10 瓶口分液器:0mL～10mL。

5.11 錐形瓶:200mL。

5.12 容量瓶(A類):100mL,250mL,500mL。

5.13 單刻度移液管(A類):容量5mL。

5.14 漏斗:直徑90mm。

5.15 定量濾紙:直徑90mm。

5.16 試管:18mm×180mm。

注:玻璃儀器使用前,用活性劑對(duì)硬玻璃測定管及其他必要的玻璃器皿進(jìn)行淸洗,清洗之后在200℃干熱2h

6.分析步驟

6.1 接種菌懸液的制備

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