1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大蒜及制品(蒜粉、蒜片)中蒜素(二烯丙基硫代亞磺酸酯)含量的高效液相色譜測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于大蒜及制品(蒜粉、蒜片)中二烯丙基硫代亞磺酸酯含量的測(cè)定。

本標(biāo)準(zhǔn)方法的檢出限*低檢出量為50ng，用于色譜分析的試樣質(zhì)量為3g時(shí)，*低檢出濃度為16.7mg/kg。

2 規(guī)范性引用文件

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GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3 原理

試樣經(jīng)破碎、用水提取后，用帶有紫外檢測(cè)器的液相色譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。

4 試劑

除非另有規(guī)定，僅使用分析純?cè)噭Ｋ疄镚B/T 6682 中規(guī)定的一級(jí)水。

4.1 甲醇(CH3OH)，色譜純。

4.2 甲酸(CHOOH)，色譜純。

4.3 乙腈(CH3CN)，色譜純。

4.4 甲酸溶液：準(zhǔn)確吸取1mL甲酸于1000mL容量瓶，用水稀釋至刻度，經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾。

4.5 甲醇溶液：取50mL甲醇，加入50mL水，混勻。

4.6 二烯丙基硫代亞磺酸酯標(biāo)準(zhǔn)品(C6H10OS2，CAS 539-86-6)。

4.7 二烯丙基硫代亞磺酸酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量的二烯丙基硫代亞磺酸酯標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶液(4.5)將其配制成質(zhì)量濃度約為500mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，該溶液于-20℃以下冷凍保存，有效期為6個(gè)月。

5 儀器

5.1 液相色譜儀，配有紫外或二*管陣列檢測(cè)器。

5.2 分析天平，感量±0.1mg和感量±1mg。

5.3 食品搗碎機(jī)。

5.4 高速均質(zhì)儀，轉(zhuǎn)速大于6000r/min。

5.5 離心機(jī)，轉(zhuǎn)速大于8000r/min。

5.6 實(shí)驗(yàn)?zāi)?/p>

5.7 試驗(yàn)篩篩孔尺寸710μm。

6 試樣的制備

6.1 鮮蒜：取有代表性的大蒜樣品可食部分，混勻縮分后，按質(zhì)量比1：1加水，用食品搗碎機(jī)粉碎制成蒜泥，作為試樣，立即按7.1處理并測(cè)定。

6.2 蒜粉：通過(guò)710m試驗(yàn)篩混勻，作為試樣，于室溫下保存。

6.3 蒜片：用實(shí)驗(yàn)?zāi)シ鬯椋ㄟ^(guò)710m試驗(yàn)篩混勻，作為試樣，于室溫下保存。

7 分析步驟

7.1 試樣處理

稱(chēng)取鮮蒜試樣3g(精確到1mg)或蒜粉(片)試樣.5g(精確到.lmg)于100mL具塞錐形瓶中，用量筒準(zhǔn)確加入50mL水，用高速均質(zhì)儀高速勻漿2min，全部轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，8000r/min離5min.? 取上清液過(guò)0.45μm濾膜，得到待測(cè)液，供高效液相色譜測(cè)定。

7.2 色譜參考條件

色譜柱：C18，250mm×4.6mm，5μm，或相當(dāng)規(guī)格色譜柱；

流動(dòng)相：乙腈(4.3)和甲酸溶液(4.4)，梯度洗脫程序見(jiàn)表1；

流速：1.0mL/min；

進(jìn)樣量：10μL；

柱溫：40℃；

檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm。

7.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作

準(zhǔn)確吸取一定量的二烯丙基硫代亞磺酸酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(4.7)，用水配制成質(zhì)量濃度約為10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L和200mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液按照色譜參考條件測(cè)定，以二烯丙基硫代亞磺酸酯質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的積分峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)工作曲線或求線性回歸方程。該標(biāo)準(zhǔn)工作溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。

7.4 測(cè)定

做兩份試料的平行測(cè)定。分別取適量待測(cè)液和相應(yīng)質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，作單點(diǎn)校準(zhǔn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，以色譜峰面積定量。待測(cè)液和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中的二烯丙基硫代亞磺酸酯的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)。在上述色譜條件下，蒜素標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖和紫外光譜圖參見(jiàn)附錄A。

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