1.范圍

本標準規定了食品中棉子糖含量測定的離子色譜方法。

本標準適用于嬰幼兒配方食品、嬰幼兒谷類輔助食品、嬰幼兒罐裝輔助食品、飲料及豆粉食品中棉子糖含量的測定。

2.原理

試樣采用乙腈沉淀、高速離心的方式去除樣品中的蛋白質和脂肪,經固相萃取柱凈化后,注入離子色譜儀,氫氧化鈉溶液為淋洗液,經陰離子交換柱分離,脈沖安培檢測器檢測。保留時間定性,外標法定量。

3.試劑和材料

除非另有說明,本方法所用試劑均為優級純,水為GB/T 6682規定的一級水。

3.1 試劑

3.1.1 乙腈(C2H3N):色譜純。

3.1.2 50%氫氧化鈉溶液(NaOH):色譜純。

3.1.3 α-淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。

3.1.4 氮氣(N2):純度≥99.99%。

3.2 試劑配制

氫氧化鈉溶液(250mmol/L):在2L塑料試劑瓶中加入500mL經過0.22μm尼龍濾膜過濾的蒸餾水,移取13.lmL氫氧化鈉(3.1.2)溶液至水面以下,加蒸餾水至1000mL,通亼氮氣保護后,搖勻備用。

3.3 標準品

棉子糖標準品(C18H32O16):純度≥99.0%。

3.4 標準溶液配制

3.4.1 標準儲備溶液(l000mg/L):準確稱取棉子糖l00mg(精確到0.1mg)于50mL燒杯中,用蒸餾水溶解,轉移到100mL容量瓶中,用水定容。搖勻,4℃保存,有效期為1個月。

3.4.2 標準使用溶液(50.0mg/L):準確吸取5mL標準儲備溶液于100mL容量瓶中,用蒸餾水定容至刻度。現用現配。

3.4.3 標準系列工作溶液:分別準確吸取棉子糖標準使用溶液0mL、1mL、2mL、5mL、10mL、20mL、50mL于100mL容量瓶中,用蒸餾水定容。得到標準曲線工作溶液濃度分別為0.000mg/L、0.500mg/L、1.00mg/L、2.50mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、25.0mg/L。

4.儀器和設備

4.1 離子色譜儀:配置脈沖安培檢測器。

4.2 天平:感量為0.1mg。

4.3 離心機:轉速≥10000r/min。

4.4 渦旋混合器。

4.5 超聲波清洗器。

4.6 固相萃取裝置。

4.7 培養箱:60℃±2℃。

4.8 固相萃取柱: OnGuardⅡRP柱(填料為反相聚二乙烯基苯聚合物)和 OnGuardⅡH柱(填料為H型聚苯乙烯基強酸樹脂),或其他等效柱。規格為1.0mL,H柱為650mg,RP柱為350mg。

4.9 0.22μm水性濾膜針頭濾器。

4.10 注射器:15mL。

5.分析步驟

5.1 試樣制備

5.1.1 試樣預處理

5.1.1.1 乳粉、米粉、豆粉等試樣:取試樣約100g(其他固體試樣先進行粉碎、硏磨),裝亼能夠容納2倍試樣體積的帶蓋容器中,通過反復搖晃和顛倒容器使試樣充分混勻直到使試樣均一化。

5.1.1.2 液體試樣:取試樣約100mL,裝入能夠容納2倍試樣體積的帶蓋容器中,通過反復搖晃和顛倒容器使試樣充分混勻直到使試樣均一化。

5.1.1.3 肉泥等其他半固體試樣:稱取試樣50.0g,稱取等量的水與之混合,渦旋混勻,超聲20min。

5.2 試樣處理

5.2.1 米粉等含淀粉的試樣:稱取混合均勻的試樣1g～5g(精確至0.1mg,含有棉子糖約為20mg)于離心管中,加入1gα-淀粉酶,固體試樣需用約50mL45℃～50℃的水使其溶解,混合均勻后充氮,蓋上管蓋,置于60℃±2℃培養箱內酶解30min。冷卻至室溫后,用水定容至100mL。

5.2.2 乳粉、豆粉、飲料、肉泥等其他試樣:稱取混合均勻的試樣1g～5g(精確至0.1mg,含有棉子糖約為20mg)于100mL燒杯中,加水溶解,固體試樣需用約50mL45℃～50℃的水使其溶解,轉移到100mL容量瓶中,用水定容。

5.3 凈化

5.3.1 吸取5mL經過處理的試樣溶液于50mL具塞錐形瓶中,加入10mL水,搖勻,超聲30min,轉移到50mL容量瓶中,加入30mL乙腈,用水定容。轉移到50mL離心管中,于10000r/min離心10 min,取上清液備用(可以根據樣液中棉子糖含量調整稀釋倍數)。

5.3.2 固相萃取柱的活化:將 OnGuardⅡRP柱使用前依次用10mL甲醇、15mL蒸餾水進行活化;onGuard ⅡH柱用10mL蒸餾水進行活化。必要時可以使用固相萃取裝置,液體流速控制在1mL/min。

5.3.3 將15mL注射器的柱筒部分、0.22μm水性濾膜針頭濾器、 OnGuardⅡRP柱、 OnguardⅡH柱順序連接，接在固相萃取裝置上。取備用的上清液（5.3.1）約15.0mL加入注射器柱筒，調節固相萃取裝置，液體流速控制在1mL/min。棄去前面3mL流出液，收集后面的流出液待測。

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下載地址：《GB 5009.258-2016 食品安全國家標準 食品中棉子糖的測定》