1 范圍

本標準規定了飼料中土霉素、四環素、金霉素的液相色譜-串聯質譜測定方法。

本標準適用于飼料中土霉素、四環素、金霉素的測定。

本標準的方法檢出限：50μg/kg。

2 規范性引用文件

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GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法(GB/T 6682-1992，neq ISO 3696：1987)

3 原理

試樣提取液經離心后，上清液用 Oasis HLB 固相萃取柱和陰離子交換柱凈化，液相色譜-串聯質譜儀測定，外標法定量。

4 試劑和材料

除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682 規定的一級水。

4.1 甲醇：色譜純

4.2 乙腈：色譜純。

4.3 鹽酸。

4.4 0.4molL鹽酸溶液：準確量取32.8mL鹽酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻。

4.5 草酸。

4.6 0.01Lmol/L草酸甲醇溶液：準確稱取草酸1.26g，用甲醇溶解并定容于1000mn容量瓶中。

4.7 甲酸

4.8 甲酸溶液：準確量取4mL甲酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻即可。

4.9 土霉素、四環素、金霉素標準物質：純度≥95%。

4.10 土霉素、四環素、金霉素標準儲備溶液：0.1mgmL。準確稱取適量的土霉素、四環素、金霉素、標準物質，分別用甲醇配成0.1mgmL的標準儲備液。儲備液貯存在-18℃冰柜中。

4.11 土霉素、四環素、金霉素基質混合標準工作溶液：根據需要吸取適量土霉素、四環素、金霉素標準儲備溶液，用空白樣品提取液稀釋成適當濃度的基質混合標準工作溶液，基質混合標準工作溶液在4℃保存，可使用三天。

4.12 OaSis hlB固相萃取柱或相當者：500mg，6mL。使用前分別用5mL甲醇和10mL水預處理，保持柱體濕潤。

5 儀器

5.1 液相色譜-串聯四級桿質譜儀，配有電噴霧離子源。

5.2 分析天平：感量0.1mg和1mg各一臺

5.3 旋渦混勻器。

5.4 固相萃取儀。

5.5 高速離心機

5.6 具塞錐形瓶：50mL。

5.7 離心管：50mL，5mL。

5.8 氮吹儀

5.9 旋轉蒸發器。

6 試樣的制備

6.1 提取

準確稱取3.0g樣品(準確至0.01g)，置于50mL具塞錐形瓶中，加入甲醇10mL，旋渦混勻1min，加入鹽酸溶液(4.4)30mL，旋渦混勻1min，超聲20min，移至50mL離心管中，5000r/mnin離心10min，取上清液，待凈化。

6.2 凈化

取10mL上清液與40mL水稀釋混勻，再移入下接 Oasis hlb柱的貯液器中。溶液以小于1.0mL/min的流速過柱，然后依次用甲醇-水溶液(4.9)淋洗，減壓抽干20min。用草酸甲醇溶液(4.6)5mL洗脫，收集洗脫液于40℃減壓旋轉蒸發至干，用1.0mL流動相溶解殘渣，12000r/min離心10min，經0.45μm有機濾膜過濾后，待測。

7 測定步驟

7.1 測定

7.1.1 液相色譜條件

色譜柱：Inertsil C8，3.5μm，150mm×2.1mm(id)或相當者；

流動相：乙腈十甲醇+0.4%甲酸溶液(18+4+78)；

流速：0.2mL/min；

柱溫：25℃；

進樣量：20μL。

7.1.2 質譜條件

離子源：電噴霧離子源；

掃描方式：正離子掃描；

檢測方式：多反應監測；

電噴霧電壓、碰撞電壓等條件優化至*佳值；

定性離子對、定量離子對見表1。

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