1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了液體乳中青霉噻唑酸鉀的高效液相色譜測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于液體乳中青霉噻唑酸鉀的測(cè)定。

本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限：10.0μg/kg。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否使用這些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件，其*新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3 原理

試樣中的青霉噻唑酸鉀在去除蛋白、脂肪處理后，經(jīng)高效液相色譜分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定性定量。

4 試劑和材料

除另有說(shuō)明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682 規(guī)定的一級(jí)水。

4.1 甲醇：色譜純

4.2 磷酸二氫鈉。

4.3 磷酸二氫鈉溶液(pH=4.5)：

4.4 無(wú)水乙醇。

4.5 青霉素V鉀標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99‰。

4.6 青霉噻唑酸鉀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1mg加L)：準(zhǔn)確稱取0.1000g青霉素Ⅴ鉀置于100mL容量瓶中，加入1mL青霉素酶，室溫放置2h后用水定容，搖勻備用。

4.7 青霉素噻唑酸鉀標(biāo)準(zhǔn)冮工作溶液：根據(jù)需要吸取適量青霉噻唑酸鉀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用空白樣品稀釋成適當(dāng)濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

5 儀器

5.1 高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器(UV)。

5.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g各一臺(tái)。

5.3 低溫高速離心機(jī)。

5.4 水相微孔濾膜：0.45μm。

6 測(cè)定步驟

6.1 試樣溶液的制備

準(zhǔn)確稱取25g(精確到0.01g)牛乳于50mL離心管中，4000r/min低溫(4℃)離心10min；去除上層脂肪層；再加入25mL無(wú)水乙醇，20000rmin低溫(4℃)離心10min，取上清液定容至50mL，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，待高效液相色譜分析。

6.2 液相色譜條件

檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm。

色譜柱：ODS C 18 5μm，250mm×2.1mm或相當(dāng)者。

流動(dòng)相：磷酸二氫鈉溶液：甲醇=50：50。

流速：1mL/min。

柱溫：30℃。

進(jìn)樣量：20μL。

6.3 測(cè)定

用青霉噻唑酸鉀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配成的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中青霉噻唑酸鉀的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)。

7 結(jié)果計(jì)算

從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上得到試樣中相應(yīng)的青霉噻唑酸鉀濃度后，結(jié)果按公式(1)計(jì)算：

式中：

X——試樣中被測(cè)組分殘留量，單位為微克每千克(μg/kg)。

C——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的試樣溶液中被測(cè)組分的濃度，單位為納克每毫升(ng/mL)。

V——試樣溶液定容體積，單位為毫升(mL)。

m——試樣質(zhì)量，單位為克(g)。

F——稀釋倍數(shù)。

8 精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的**差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。

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