1.范圍

本標準規定了食品中酒石酸、乳酸、蘋果酸、檸檬酸、丁二酸、富馬酸和已二酸的測定方法。

本標準適用于果汁及果汁飲料、碳酸飲料、固體飲料、膠基糖果、餅干、糕點、果凍、水果罐頭、生濕面制品和烘焙食品餡料中7種有機酸的測定。

2.原理

試樣直接用水稀釋或用水提取后,經強陰離子交換固相萃取柱凈化,經反相色譜柱分離,以保留時間定性,外標法定量。

3.試劑和材料

除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規定的一級水。

3.1 試劑

3.1.1 甲醇(CH3OH):色譜純。

3.1.2 無水乙醇(CH3CH2OH):色譜純。

3.1.3 磷酸(H3PO4)。

3.2 試劑配制

3.2.1 磷酸溶液(0.1%):量取磷酸0.1mL,加水至100mL,混勻。

3.2.2 磷酸-甲醇溶液(2%):量取磷酸2mL,加甲醇至100mL,混勻。

3.3 標準品

3.3.1 乳酸標準品(C3H6O3),純度≥99%。

3.3.2 酒石酸標準品(C4H6O6),純度≥99%

3.3.3 蘋果酸標準品(C4H6O5),純度≥99%。

3.3.4 檸檬酸標準品(C6H8N7),純度≥98%。

3.3.5 丁二酸標準品(C4H6N4),純度≥99%。

3.3.6 富馬酸標準品(C4H4O4),純度≥99%。

3.3.7 己二酸標準品(C6H10N4),純度≥99%

3.4 標準溶液配制

3.4.1 酒石酸、蘋果酸、乳酸、檸檬酸、丁二酸和富馬酸混合標準儲備溶液:分別稱取酒石酸1.25g、蘋果酸2.5g、乳酸2.5g、檸檬酸2.5g、丁二酸6.25g(精確至0.01g)和富馬酸2.5mg(精確至0.01mg)于50mL小燒杯中,加水溶解,用水轉移到50mL容量瓶中,定容,混勻,于4℃保存,其中酒石酸質量濃度為2500μg/mL、蘋果酸5000μg/mL、乳酸5000μg/mL、檸檬酸5000μg/mL、丁二酸12500μg/mL和富馬酸12.5μg/mL。

3.4.2 酒石酸、蘋果酸、乳酸、檸檬酸、丁二酸、富馬酸混合標準曲線工作液:分別吸取混合標準儲備溶液(3.4.1)0.50mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL于25mL容量瓶中,用磷酸溶液(3.2.1)定容至刻度,混勻,于4℃保存。

3.4.3 己二酸標準儲備溶液(500μg/mL):準確稱取按其純度折算為****質量的已二酸12.5mg,置25mL容量瓶中,加水到刻度,混勻,于4℃保存。

3.4.4 己二酸標準曲線工作液:分別吸取標準儲備溶液(3.4.3)0.50mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL于25mL容量瓶中,用磷酸溶液(3.2.1)定容至刻度,混勻,于4℃保存。

3.5 材料

強陰離子固相萃取柱(SAX):1000mg,6mL。使用前依次用5mL甲醇、5mL水活化。

4.儀器和設備

4.1 高效液相色譜儀,帶二*管陣列檢測器或紫外檢測器。

4.2 天平:感量為0.01mg和0.01g。

4.3 高速均質器。

4.4 高速粉碎機。

4.5 固相萃取裝置。

4.6 水相型微孔濾膜:孔徑0.45μm。

5.分析步驟

警告:實驗人員在使用液氮時,應佩戴手套等防護工具,防止意外灑濺,造成凍傷。

5.1 試樣制備及保存

5.1.1 液體樣品

將果汁及果汁飲料、果味碳酸飲料等樣品搖勻分裝,密閉常溫或冷藏保存。

5.1.2 半固態樣品

對果凍、水果罐頭等樣品取可食部分勻漿后,攪拌均勻,分裝,密閉冷藏或冷凍保存。

5.13 固體樣品

餅干、糕點和生濕面制品等低含水量樣品,經高速粉碎機粉碎、分裝,于室溫下避光密閉保存;對于固體飲料等呈均勻狀的粉狀樣品,可直接分裝,于室溫下避光密閉保存。

5.1.4 特殊樣品

對于膠基糖果類黏度較大的特殊樣品,現將樣品用剪刀鉸成約2mm×2mm大小的碎塊放人陶瓷硏缽中,再緩慢倒入液氮,樣品迅速冷凍后采用研磨的方式獲取均勻的樣品,分裝后密閉冷凍保存。

5.2 試樣處理

5.2.1 果汁飲料及果汁、果味碳酸飲料

稱取5g(精確至0.01g)均勻試樣(若試樣中含二氧化碳應先加熱除去),放入25mL容量瓶中,加水至刻度,經0.45μm水相濾膜過濾,注入高效液相色譜儀分析。

5.2.2 果凍、水果罐頭

稱取10g(精確至0.01g)均勻試樣,放入50mL塑料離心管中,向其中加入20mL水后在15000r/min的轉速下均質提取2min,4000r/min離心5min,取上層提取液至50mL容量瓶中,殘留物再用20mL水重復提取一次,合并提取液于同一容量瓶中,并用水定容至刻度,經0.45m水相濾膜過濾,注入高效液相色譜儀分析。

5.2.3 膠基糖果

稱取1g(精確至0.01g)均勻試樣,放入50mL具塞塑料離心管中,加入20mL水后在旋混儀上振蕩提取5min,在4000r/min下離心3min后,將上清液轉移至10omL容量瓶中,向殘渣加入20mL水重復提取1次,合并提取液于同一容量瓶中,用無水乙醇(3.1.2)定容,搖勻準確移取上清液10mL于100mL雞心瓶中,向雞心瓶中加入10mL無水乙醇(3.1.2),在80℃士2℃下旋轉濃縮至近干時,再加入5mL無水乙醇(3.1.2)繼續濃縮至徹底干燥后,用1mL×1mL水洗滌雞心瓶2次。將待凈化液全部轉移至經過預活化的SAX固相萃取柱中,控制流速在1mL/min～2mL/min,棄去流岀液。用5mL水淋洗浄化柱,再用5mL磷酸-甲醇溶液(3.2.2)洗脫,控制流速在lmL/min～2mL/min,收集洗脫液于50mL雞心瓶中,洗脫液在45℃下旋轉蒸發近干后,再加入5mL無水乙醇(3.1.2)繼續濃縮至徹底干燥后,用1.0mL磷酸溶液(3.2,1)振蕩溶解殘渣后過0.45μm濾膜后,注入高效液相色譜儀分析。

5.2.4 固體飲料

稱取5g(精確至0.01g)均勻試樣,放亼50mL燒杯中,加40mL水溶解并轉移至100mL容量瓶中,用無水乙醇(3.1.2)定容至刻度,搖勻,靜置10min

準確移取上清液20mL于100mL雞心瓶中,向雞心瓶中加人10mL無水乙醇(3.1.2),在80℃士2℃下旋轉濃縮至近干時，再加入5mL無水乙醇（3.1.2）繼續濃縮至徹底干燥后，用1mL×1mL水洗滌雞心瓶2次。將待凈化液全部轉移至經過預活化的SAX固相萃取柱中,控制流速在1mL/min～2mL/min,棄去流岀液。用5mL水淋洗凈化柱,再用5mL磷酸-甲醇溶液(3.2.2)洗脫,控制流速在lmL/min～2mL/min,收集洗脫液于50mL雞心瓶中,洗脫液在45℃下旋轉蒸發近干后,再加入5mL無水乙醇(3.1.2)繼續濃縮至徹底干燥后,用1.0mL磷酸溶(3.2.1)振蕩溶解殘渣后過0.45μm濾膜后,注入高效液相色譜儀分析。

5.2.5 面包、餅干、糕點、烘焙食品餡料和生濕面制品

稱取5g(精確至0.01g)均勻試樣,放入50mL塑料離心管中,向其中加入20mL水后在15000r/min均質提取2min,在4000r/min下離心3min后,將上清液轉移至100mL容量瓶中,向殘渣加入20mL水重復提取1次,合并提取液于同一容量瓶中,用無水乙醇(3.1.2)定容,搖勻。

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