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1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中金黃色葡萄球菌( Staphylococcus aureus)的檢驗(yàn)方法。

本標(biāo)準(zhǔn)**法適用于食品中金黃色葡萄球菌的定性檢驗(yàn);第二法適用于金黃色葡萄球菌含量較髙的食品中金黃色葡萄球菌的計(jì)藪;第三法適用于金黃色葡萄球菌含量較低的食品中金黃色葡萄球菌的計(jì)數(shù)。

2.設(shè)備和材料

除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下：

2.1 恒溫培養(yǎng)箱:36℃±1℃。

2.2 冰箱:2℃～5℃。

2.3 恒溫水浴箱:36℃～56℃。

2.4 天平:感量0.1g。

2.5 均質(zhì)器。

2.6 振蕩器。

2.7 無(wú)菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭。

2.8 無(wú)菌錐形瓶:容量100mL、500mL。

2.9 無(wú)菌培養(yǎng)皿:直徑90mm。

2.10 涂布棒。

2.11 pH計(jì)或pH比色管或精密pH試紙。

3.培養(yǎng)基和試劑

3.1 7.5%氯化鈉肉湯:見(jiàn)A.1。

3.2 血瓊脂平板:見(jiàn)A.2。

3.3 Baird- Parker瓊脂平板:見(jiàn)A.3。

3.4 腦心浸出液肉湯(BHI):見(jiàn)A.4。

3.5 兔血漿:見(jiàn)A.5。

3.6 稀釋液:磷酸鹽緩沖液:見(jiàn)A.6。

3.7 營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面:見(jiàn)A.7。

3.8 革蘭氏染色液:見(jiàn)A.8。

3.9 無(wú)菌生理鹽水:見(jiàn)A.9。

**法金黃色葡萄球菌定性檢驗(yàn)

4.檢驗(yàn)程序

金黃色葡萄球菌定性檢驗(yàn)程序見(jiàn)圖1。

5.操作步驟

5.1 樣品的處理

稱取25g樣品至盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi),8000r/min～10000r/min均質(zhì)lmin～2min,或放入盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯無(wú)菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min。若樣品為液態(tài),吸取25mL樣品至盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯的無(wú)菌錐形瓶(瓶?jī)?nèi)可預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠)中,振蕩混勻。

5.2 增菌

將上述樣品勻液于36℃士1℃培養(yǎng)18h~24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長(zhǎng)。

5.3 分離

將增菌后的培養(yǎng)物,分別劃線接種到 Baird- Parker平板和血平板,血平板36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。Baird- Parker平板36℃士1℃培養(yǎng)24h～48h。

5.4 初步鑒定

金黃色葡萄球菌在 Baird- Parker平板上呈圓形,表面光滑、凸起、濕潤(rùn)、菌落直徑為2mm～3mm,顏色呈灰黑色至黑色,有光澤,常有淺色(非白色)的邊緣,周圍繞以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰帶。當(dāng)用接種針觸及菌落時(shí)具有黃油樣黏稠感。有時(shí)可見(jiàn)到不分解脂肪的菌株,除沒(méi)有不透明圈和清晰帶外,其他外觀基本相同。從長(zhǎng)期貯存的冷凍或脫水食品中分離的菌落,其黑色常較典型菌落淺些且外觀可能較粗糙,質(zhì)地較干燥。在血平板上,形成菌落較大,圓形、光滑凸起、濕潤(rùn)、金黃色(有時(shí)為白色）菌落周圍可見(jiàn)完全透明溶血圈。挑取上述可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗(yàn)。

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