1.范圍

本標準規定了食品中空腸彎曲菌( Campylobacter jejuni)的檢驗方法。

本標準適用于食品中空腸彎曲菌的檢驗。

2.設備和材料

除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外,其他設備和材料如下:

a) 恒溫培養箱:25℃±1℃、36℃±1℃、42℃±1℃；

b) 冰箱:2℃～5℃

c) 恒溫振蕩培養箱:36℃±1℃、42℃±1℃;

d) 天平:感量0.1g；

e) 均質器與配套均質袋；

f) 振蕩器;

g) 無菌吸管:1mL(具001m刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭；

h) 無菌錐形瓶:容量100mL、200mL、2000mL;

i) 無菌培養皿:直徑90mm;

j) pH計或pH比色管或精密pH試紙；

k) 水浴裝置:36℃±1℃、100℃;

l) 微需氧培養裝置:提供微需氧條件(5%氧氣、10%二氧化碳和85%氮氣);

m) 過濾裝置及濾膜(0.22μm、0.45μm);

n) 顯微鏡:10倍~10倍,有相差功能;

o) 離心機:離心速度≥20000g;

p) 比濁儀;

q) 微生物生化鑒定系統。

3.培養基和試劑

3.1 Bolton肉湯( Bolton broth):見附錄A中A.1。

3.2 改良CCD瓊脂( modified Charcoal Cefoperazone Deoxycholate Agar, cCDA):見附錄A中A2。

3.3 哥倫比亞血瓊脂( Columbia blood agar):見附錄A中A3。

3.4 布氏肉湯( Brucella broth):見附錄A中A4。

3.5 氧化酶試劑:見附錄A中A.5。

3.6 馬尿酸鈉水解試劑:見附錄A中A.6

3.7 Skirrow血瓊脂( Skirrow blood agar):見附錄A中A.7。

3.8 吲哚乙酸酯紙片:見附錄A中A.8。

3.9 0.1%蛋白胨水:見附錄A中A9。

3.10 lmol/L硫代硫酸鈉(Na2S2O3)溶液:見附錄A中A.10。

3.11 3%過氧化氫(H2O2)溶液:見附錄A中A.11。

3.12 空腸彎曲菌顯色培養基。

3.13 生化鑒定試劑盒或生化鑒定卡。

4.檢驗程序

空腸彎曲菌檢驗程序見圖1。

5.操作步驟

5.1 樣品處理

5.1.1 一般樣品

取25g(mL)樣品(水果、蔬菜、水產品為50g)加入盛有225 mL Bolton肉湯的有濾網的均質袋中(若為無濾網均質袋可使用無菌紗布過濾),用拍擊式均質器均質1min~2min,經濾網或無菌紗布過濾,將濾過液進行培養。

5.1.2 整禽等樣品

用200mL0.1%的蛋白胨水中充分沖洗樣品的內外部,并振蕩2min～3min,經無菌紗布過濾至250mL離心管中,16000g離心15min后棄去上清,用10mL0.1%蛋白胨水懸浮沉淀,吸取3mL于100mLBolton肉湯中進行培養。

5.1.3 貝類

取至少12個帶殼樣品,除去外殼后將所有內容物放到均質袋中,用拍擊式均質器均質1min～2min,取25g樣品至225mL Bolton肉湯中(1:10稀釋),充分震蕩后再轉移25mL于225mL Bolton肉湯中(1:100稀釋),將1:10和1:100稀釋的 Bolton肉湯同時進行培養。

5.1.4 蛋黃液或蛋漿

取25g(mL)樣品于125mL Bolton肉湯中并混勻(16稀釋),再轉移25mL于100mL Bolton肉湯中并混勻(1:30稀釋),同時將1:6和1:30稀釋的 Bolton肉湯進行培養。

5.1.5 鮮乳、冰淇淋、奶酪等

若為液體乳制品取50g;若為固體乳制品取50g加入盛有50mL0.1%蛋白胨水的有濾網均質袋中,用拍擊式均質器均質15s~30s,保留過濾液。必要時調整pH值至7.5±0.2,將液體乳制品或濾過液以20000g離心30min后棄去上清,用l0mL Bolton肉湯懸浮沉淀(盡量避免帶入油層),再轉移至90mLBolton肉湯進行培養。

5.1.6 需表面涂拭檢測的樣品

無菌棉簽擦拭檢測樣品的表面(面積至少100cm2以上),將棉簽頭剪落到100mL Bolton肉湯中進行培養。

5.1.7 水樣

將4L的水(對于氯處理的水,在過濾前每升水中加入5mL Imol/L硫代硫酸鈉溶液)經0.45μm濾膜過濾,把濾膜浸沒在100 ml Bolton肉湯中進行培養。

5.2 預增菌與增菌

在微需氧條件下,36℃±1℃培養4h,如條件允許配以100r/min的速度進行振蕩。必要時測定增菌液的pH值并調整至74±0.2,42℃±1℃繼續培養24h～48h。

5.3 分離

將24h增菌液、48h增菌液及對應的1:50稀釋液分別劃線接種于 Skirrow血瓊脂與 mCCDA瓊脂平板上,微需氧條件下42℃±1℃培養24h～48h。另外可選擇使用空腸彎曲菌顯色平板作為補充。

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下載地址：《GB 4789.9-2014 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 空腸彎曲菌檢驗》