1 范圍

本標準規定了出口食品中黃曲霉毒素殘留量的高效液相色譜法和熒光光度測定方法。

本標準中高效液相色譜法適用于玉米、茶葉、花生果、花生米和苦杏仁中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的測定；熒光光度法適用于玉米、花生果花生米和苦杏仁中黃曲霉毒素總量的測定。

2 規范性引用文件

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GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法

**法高效液相色譜法

3 測定方法

3.1 方法提要

試樣中的黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2用三氯聲烷提取，提取液經弗羅里硅土柱凈化濃縮，定容[或用甲醇水(7+3)提取提取液經過濾、稀釋后，用免疫親和柱凈化，以甲醇洗脫]。*后用柱后衍生液相色譜熒光檢測器法測定，外標去定量。

3.2 試劑和材料

除另有規定外，所用試劑均分析純，水為GB/T 6682 規定的二級水。

3.2.1 三氯甲烷。

3.2.2 苯：高效液相色譜純。

3.2.3 乙腈：高效液相色譜純。

3.2.4 甲醇：高效液相色譜純。

3.2.5 丙酮。

3.2.6 無水硫酸鈉：600℃灼燒4h，貯于干燥器中備用。

3.2.7 硅藻土：Celit 545

3.2.8 弗羅里硅土：60~100目，600℃灼燒4h，貯于干燥器中備用，使用前130℃活化4h。

3.2.9 過溴化溴化吡啶(pyridinium bromide perbromide)

3.2.10 氯化鈉。

3.2.11 甲醇。

3.2.12 甲醇水(7+3，體積比)：量取700mL甲醇(3.2.11)與300mL水混合。

3.2.13 乙腈水溶液(1+1，體積比)：量取100mL乙腈(3.2.4)與100mL水混合。

3.2.14 苯-乙腈溶液(98+2，體積比)：量取980mL苯(3.2.2)與20mL乙腈(3.2.3)混合

3.2.15 三氯甲烷-甲醇溶液(9十1，體積比)：量取900mL三氛甲烷(3.2.1)與100mL甲醇(3.2.11)混合。

3.2.16 丙酮水溶液(99+1，體積比)：量取990mL丙酮(3.2.7)與10mL水混合。

3.2.17 柱后衍生液(0.05mg/mL過溴化溴化吡啶水溶液)：稱取0.05g過溴化溴化吡啶，溶解于1000mL水中，以0.45μm的濾膜過濾。

3.2.18 次氯酸鈉溶液(有效氯含量為5%)：用于浸泡器皿，去除黃曲霉毒素污染。

3.2.19 黃曲霉毒素B1(CAS 編號1162-65-8)、B2(CAS 編號7220-81-7)、G1(CAS 編號1165-39-5)、G2(CAS 編號7241-98-7)標準物質：純度大于等于99%。

3.2.20 黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2標準儲備溶液：準確稱取適量黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2標準物質(3.2.19)，用苯-乙腈溶液(3.2.14)配成0.1mg/mL的標準儲備液。該溶液于4℃避光保存。

3.2.21 1μg/mL的黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2混合標準中間溶液：分別吸取1mL標準儲備溶液(3.2.20)移至100mL容量瓶中，用乙腈(3.2.3)定容至刻度。該溶液在4℃避光保存。

3.2.22 黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2混合標準工作溶液：根據需要適當移取黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2混合標準中間溶液，用甲醇稀釋成適當濃度的混合標準工作溶液，混合標準工作溶液現用現配。

3.3 儀器和設備

3.3.1 高效液相色譜儀配有熒光檢測器和柱后衍生裝置。

3.3.2 高速均質器。

3.3.3 玻璃纖維濾紙。

3.3.4 玻璃注射器：10mL、20mL。

3.3.5 空氣壓力泵。

3.3.6 旋渦振蕩器。

3.3.7 平板搖床。

3.3.8 真空泵。

3.3.9 旋轉蒸發器。

3.3.10 心形瓶。

3.3.11 柱后衍生泵。

3.3.12 光化學衍生裝置。

3.3.13 電化學衍生裝置

3.3.14 0.45μm濾膜。

3.3.15 氮氣

3.3.16 黃曲霉毒素免疫親和柱：含有黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的抗體。

3.3.17 弗羅里硅土凈化柱：玻璃柱，30cm×20cm(內徑)，用三氯甲烷濕法依次裝人1g無水硫酸鈉，0.7g弗羅里硅土(3.2.10)，5g無水硫酸鈉。

3.4 測定步驟

3.4.1 提取凈化(可根據實驗條件選用以下任何一種方法)

3.4.1.1 免疫親和層析凈化

稱取試樣25g(精確到0.01g)于250mL具塞錐形瓶中，加人5g氯化鈉及125mL甲醇-水(3.2.12)，以均質器高速攪拌提取2min。過濾，移取15.0mL濾液至250mL具塞錐形瓶中，并加人30.0mL水稀釋混勻，以玻璃纖維濾紙過濾幾次，直至濾液澄清，隨即進行免疫親和柱凈化操作。將免疫親和柱連接于20mL玻璃針筒下，準確移取15.0mL(相當于1g試樣)上述澄清濾液，注入玻璃針筒中，將空氣壓力泵與針筒連接，調節壓力使溶液以約6mL/min流速全部過免疫親和柱，再使2mL~3mL空氣通過柱體。以2×10mL水淋洗柱子，棄去全部流出液，再使2mL~3mL空氣通過柱體準確加人1.0mL甲醇(3.2.4)進行洗脫，洗脫流速為1mL/min~2mL/min。收集全部洗脫液于玻璃試管中，供液相色譜測定。

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