1 范圍

本標準規定了新鮮水果中有機酸(檸檬酸、蘋果酸、酒石酸和琥珀酸)含量的離子色譜測定方法。

本標準適用于新鮮水果中有機酸(檸檬酸、蘋果酸、酒石酸和琥珀酸)含量的測定。

2 規范性引用文件

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GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T 8855 新鮮水果和蔬菜取樣方法

3 原理

試樣經乙醇溶液超聲提取過濾后，用離子色譜柱進行分離，用離子色譜儀一電導檢測器測定，以保留時間定性，標準曲線法定量。

4 試劑和材料

除非另有說明在分析中僅使用優級純或以上試劑，實驗用水符合GB/T 6682 的一級水指標。

4.1 試劑的配制

4.1.1 無水乙醇(C2H6O)。

4.1.2 硫酸(H2SO4)。

4.1.3 乙醇溶液(1+9)：量取100mL無水乙醇與900mL水混勻。

4.1.4 硫酸溶液Ⅰ(0.5mol/L)：準確吸取13.6mL硫酸，緩緩注入事先加有200mL水的燒杯中，混勻并冷卻后轉移到500mL容量瓶中，用水定容。

4.1.5 硫酸溶液Ⅱ(0.005mol/L)：準確吸取0.5mol/L硫酸溶液Ⅰ(4.1.4)10mL于1000mL容量瓶中，用水稀釋，用水定容。

4.1.6 氯化鋰溶液(0.lmol/L)：稱取2.12g氯化鋰于50mL燒杯中，用水溶解，轉移到500mL容量瓶中，用水定容。

4.2 標準品

4.2.1 檸檬酸標準品(純度≥9.0%)。

4.2.2 蘋果酸標準品(純度≥99.0%)。

4.2.3 酒石酸標準品(純度≥99.0%)。

4.2.4 琥珀酸標準品(純度≥99.0%)。

4.3 標準儲備液

4.3.1 檸檬酸標準儲備液(4.00g/L)：準確稱取0.4000g檸檬酸(干燥器中干燥24h)于100mL燒杯中，用水溶解，轉移到100mL容量瓶中，用水定容。在0℃~5℃下保存，有效期3個月。

4.3.2 蘋果酸標準儲備液(2.00g/L)：準確稱取0.2000g蘋果酸(干燥器中干燥24h)于100mL燒杯中，用水溶解，轉移到100mL容量瓶中，用水定容。在0℃~5℃下保存，有效期3個月。

4.3.3 酒石酸標準儲備液(2.00g/L)：準確稱取0.2000g酒石酸(干燥器中于燥24h)于100mL燒杯中，用水溶解，轉移到100ml容量瓶中，用水定容。在0℃~5℃下保存，有效期3個月。

4.3.4 琥珀酸標準儲備液(1.00g/L)：準確稱取琥珀酸0.1000g(干燥器中干燥24h)于100mL燒杯中，用水溶解，轉移到100mL容量瓶中，用水定容。在0℃~5℃下保存，有效期3個月。

4.4 標準工作溶液：分別準確吸取0.00mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL有機酸標準儲備液(4.3)，于50mL容量瓶中，用乙醇溶液(4.1.3)稀釋定容，即得有機酸混合系列標準工作溶液檸檬酸質量濃度分別為0.00g/L、0.08g/L、0.16g/L、0.24g/L、0.32g/L、0.40g/L，蘋果酸和酒石酸質量濃度分別為0.00g/L、0.04g/L、0.06g/L、0，12g/L、0.16g/L、0.20g/L，琥珀酸質量濃度分別為0.00g/L、0.02g/L、0.04g/、0.06g/L、0.08g/L、0.10g/L。

5 儀器和設備

5.1 離子色譜儀：配電導檢測器。

5.2 分析天平：感量±0.01g、±0.001g和±0.0001g。

5.3 組織搗碎機

5.4 超聲波提取器。

5.5 溶劑過濾器：0.45μm水性濾膜。

5.6 針頭過濾器：0.22μm水性濾膜。

6 分析步驟

6.1 試樣制備

按照GB/T 8855 的規定抽取水果樣品，取可食部分，經縮分后，將其切碎，充分混勻后放入組織搗碎機中制成勻漿。將勻漿后的試樣取500g裝入樣品瓶中冷凍保存。

6.2 提取和凈化

稱取試樣2.0g~5.0g(精確至0.001g)于150m三角瓶中，加入約80m乙醇溶液(4.1.3)，搖勻后置超聲波提取器中提取30min，然后轉移至100mL容量瓶中，用乙醇溶液(4.1.3)定容，過0.22μm水性濾膜針頭過濾器，供離子色譜分析用。

6.3 儀器參考條件

6.3.1 離子色譜柱： ICSep COREGEL-64H，7.8mm×300mm，或其他性能相當的色譜柱。

6.3.2 柱溫：65℃。

6.3.3 流速：0.60mL/min。

6.3.4 進樣體積：20μL。

6.3.5 淋洗液：硫酸溶液Ⅱ(4.1.5)，臨用前過溶劑過濾器。

6.3.6 抑制器再生液：濃度為0.1mol/L的氯化鋰溶液(4.1.6)，臨用前過溶劑過濾器。

6.4 標準工作曲線

將有機酸混合系列標準工作溶液(4.4)經0.2μm水性濾膜針頭過濾器過濾后按6.3進行測定。以質量濃度為橫坐標，以峰髙或峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。有機酸標準溶液色譜圖參見附錄A。

6.5 測定

在相同工作條件下以保留時間定性，以峰高或峰面積比較定量。試樣溶液中檸檬酸、酒石酸、蘋果酸和琥珀酸峰髙或峰面積超過冇機酸混合標準工作溶液*髙點時，則將待測液稀釋后重新測定。

6.6 空白試驗

除不加試樣外，其他步驟同試樣操作步驟進行。

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