??? 摘 要：豬流感是世界性流行的呼吸系統(tǒng)傳染病之一,當(dāng)與其它病原混合感染時會造成更嚴(yán)重的損害。它的免疫機制主要為黏膜免疫和體液免疫,滴鼻和肌肉注射都能產(chǎn)生高效的免疫應(yīng)答。當(dāng)前流行的豬流感病毒亞型主要為H1N1、H1N2和H3N2，常用的疫苗都是滅活苗。因為豬流感病毒亞型較多、抗原易發(fā)生變異和可在種間傳播,給流感疾病的預(yù)防乃至人類的健康帶來很多挑戰(zhàn)。核酸疫苗、合成肽苗和基因工程苗的研究為豬流感的預(yù)防提供了廣闊前景。

??? 關(guān)鍵詞：豬流感病毒；抗原漂移；免疫 豬流感是世界上*常見的豬傳染病之一，傳播迅速,常引起急性呼吸道疾病暴發(fā)。其典型的臨床癥狀為流鼻涕、咳嗽和呼吸困難,伴有發(fā)熱、嗜睡以及隨之而來的厭食和消瘦等癥狀。因為在單獨感染的情況下很少引起死亡,所以在國內(nèi)并沒有引起足夠的重視,使用豬流感病毒（Swine influenza virus, SIV）疫苗進(jìn)行免疫的豬場為數(shù)甚少。然而，SIV與豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive respiratory syndrome virus, PRRSV)、圓環(huán)病毒及肺炎支原體混合感染時，會顯著增加上述疾病的損害程度和病死率。另外, SIV也是豬呼吸道疾病綜合征(Porcine respiratory disease complex，PRDC)的主要病原。SIV與其它病原體共感染或繼發(fā)感染所造成的損害已成為制約豬場經(jīng)濟效益的主要原因之一。由于豬流感在禽流感和人流感流行、傳播和分子變異中的特殊作用,它對公共衛(wèi)生也有著十分重要的意義。

??? 1 豬流感病毒的主要亞型

??? 1.1 流感病毒亞型分類的主要依據(jù)

??? SIV是正黏病毒科流感病毒屬中A型流感病毒的成員，其基因組為8個片段的單鏈副股RNA。其中片段5編碼主要的結(jié)構(gòu)蛋白――核衣殼蛋白（Nucleocapsidprotein,NP），它的主要功能是與病毒RNA形成RNP復(fù)合體,以此來穩(wěn)定病毒RNA，使其免受RNA酶的降解作用。NP具有良好的抗原性且不易變異,因此,根據(jù)NP抗原性的不同,可將流感病毒區(qū)分為A、B、C 3型。雖然A型SIV的NP基因核苷酸序列與其它型的顯著不同(同源率為60%)，但SIV的不同毒株之間卻表現(xiàn)為高度保守(同源率可達(dá)90％)。因此，以NP基因為模板的RT-PCR可特異性地用于A型SIV的檢測。SIV的RNA片段4和片段6分別編碼血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）,它們是流感病毒亞型分類的依據(jù)。目前已發(fā)現(xiàn)的流感病毒HA亞型有15個，NA亞型有9個[1]。盡管不同的亞型之間可以組成很多種流感病毒血清型。但目前造成世界性流行SIV血清型只有H1N1，H1N2和H3N2。也有其它血清型的零星報道,如英國的H1N7[2]，美國的H4N6[3],中國的H9N2[4]和H5N1[5]等,但都沒有造成大規(guī)模的流行。

??? 1.2 豬流感在國內(nèi)外流行的歷史和現(xiàn)狀

??? 豬流感自152 0173 3840年在美國首次發(fā)生以來,已造成世界范圍內(nèi)的多次大流行。SIV于1931年由Shope首次分離并鑒定,這就是20世紀(jì)初引起美國豬流感流行的古典型H1N1病毒株。與美國不同的是,歐洲大陸豬流感發(fā)生較晚,直到20世紀(jì)70年代末才出現(xiàn)暴發(fā)式流行,其流行的毒株雖然也是H1N1,但是與美國流行的古典型SIV在抗原性和遺傳性上均有顯著差異,而與來自鴨的H1N1有著很高的同源性。為了區(qū)別2種不同的H1N1毒株,通常把后者稱為類禽型H1N1。這2種H1N1隨后都傳入亞洲等世界各國并長期流行。1969年H3N2亞型SIV首次被分離于臺灣, 1970年在香港也分離到SIV的H3N2亞型毒株。這次流行的H3N2毒株及其變異株在以后的十多年間傳播到了世界各地。1984年，歐洲大陸首次報道了類人H3N2亞型毒株引起的豬流感暴發(fā)，并且整個歐洲大陸的豬群都表現(xiàn)高水平的抗體。1988年，美國許多接種了H1N1流感疫苗的豬場暴發(fā)嚴(yán)重的豬流感，其病原經(jīng)鑒定為H3N2亞型毒株。此后, H1N1和H3N2成為世界各國廣泛流行的2個SIV主要血清型[6]。研究表明,近幾年發(fā)生于日本、韓國、美國的H1N2亞型SIV是H1N1和H3N2的重組產(chǎn)物,因為H1N1和H3N2疫苗的雙重免疫豬對H1N2亞型SIV感染具有交叉保護(hù)作用[7]。我國豬流感的血清學(xué)和病原學(xué)調(diào)查結(jié)果都表明,在我國橫跨南北的多個省市都有嚴(yán)重的豬流感流行,其主要亞型是H1N1和H3N2[8-10]。值得注意的是這些流行病學(xué)調(diào)查是建立在豬場發(fā)生典型流感的基礎(chǔ)之上,而近年來豬流感越來越朝著多病原混合感染的方向發(fā)展。當(dāng)SIV與豬藍(lán)耳病病毒、胸膜肺炎放線桿菌、肺炎支原體等混合感染時,其危害性會顯著增加，死亡率顯著增高[11-13]。

??? 2 豬流感病毒宿主特異性及其變異??

??? 2.1 流感病毒宿主特異性的分子生物學(xué)基礎(chǔ)

??? 種間傳播是SIV的顯著特點之一。在流感病毒的感染過程中,HA起識別和吸附細(xì)胞受體的作用，它是宿主特異性的主要決定因素。不同動物氣管黏膜上的細(xì)胞受體與HA分子上的受體結(jié)合位點特異性結(jié)合,不同種類流感病毒的HA具有不同唾液酸酶分子結(jié)構(gòu),結(jié)合不同的唾液酸受體,但這種結(jié)合又具有交叉性。禽流感病毒和馬流感病毒的受體為唾液酸α2,3-半乳糖苷,人流感病毒的受體為唾液酸α2,6-半乳糖苷,而豬流感病毒對這2種受體都具有親和性,豬的呼吸道黏膜上也同時具有這2種受體[14]。也就是說豬也能夠感染人、禽、馬流感病毒,豬流感病毒也能感染上述動物。當(dāng)然,流感病毒的吸附和感染還需要宿主細(xì)胞膜表面糖蛋白及其它因素的參與[15]。人類152 0173 3840年的西班牙流感、1957年的亞洲流感和1968年的香港流感都與當(dāng)時的豬流感發(fā)生有著密切的關(guān)系。越南、泰國*近報道有多人死于禽流感病毒感染,在從禽到人的傳播過程中是否有豬的參與尚無定論,所幸的是至今還沒有發(fā)現(xiàn)動物流感病毒在人之間相互傳播的證據(jù)。所以,豬流感不僅制約豬場經(jīng)濟效益,對整個養(yǎng)殖業(yè)乃至人類的健康都具有嚴(yán)重威脅。

??? 2.2 豬流感病毒的遺傳變異。

??? 抗原變異快速是流感病毒的又一顯著特點。HA、NA位于病毒囊膜的表面,是變異率*高的抗原蛋白質(zhì)。流感病毒的抗原變異包括抗原漂移和抗原轉(zhuǎn)變。抗原轉(zhuǎn)變變異的幅度較大,常導(dǎo)致新亞型的產(chǎn)生。A型流感病毒有8個基因組片段,當(dāng)2個或2個以上的不同病毒粒子同時感染1個宿主細(xì)胞時,在病毒的增殖過程中,不同病毒粒子的8個基因組片段可以隨機相互交換，重組產(chǎn)生1個新亞型的流感病毒。因此,同1個亞型的不同株之間可能存在著較大的抗原性差異。流行于北美的H3N2型SIV就是1個包含有人、豬、禽3種流感病毒基因片段的重組子[16]；流行于日本的H1N2豬流感病毒是類禽型HA和人流感病毒的NA重組而成[17]。HA、NA還可以因自發(fā)的點突變而引起小幅度的變異,我們稱之為抗原漂移。發(fā)生抗原漂移的原因是合成流感病毒RNA所需要的RNA聚合酶缺乏校正功能,病毒復(fù)制過程中核苷酸的點突變可能引起它所編碼的氨基酸變異,當(dāng)氨基酸變異達(dá)到一定程度時,就導(dǎo)致了抗原決定簇的改變,即抗原性發(fā)生變化。SIV的抗原變異能夠幫助其逃脫宿主已建立的免疫,給豬流感的預(yù)防帶來更大的困難。對世界各地分離的不同毒株的核苷酸測序,借助生物軟件來分析這些毒株之間的譜系及遺傳變異關(guān)系,是當(dāng)今對豬流感病毒進(jìn)行研究的熱點之一。

??? 3 豬流感的免疫機制及預(yù)防

??? 3.1 豬流感的免疫機制

??? 豬流感以黏膜免疫和體液免疫為主, T細(xì)胞也以一定的方式參與其中。呼吸道是SIV感染的主要途徑,所以黏膜免疫對豬流感的預(yù)防至關(guān)重要。黏膜免疫系統(tǒng)是體內(nèi)相對獨立的免疫體系,在動物的支氣管內(nèi)存在著集合淋巴小結(jié)、彌散免疫細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞,能夠完成抗原遞呈及免疫應(yīng)答等一系列免疫反應(yīng)。黏膜上皮內(nèi)的淋巴細(xì)胞包括了M細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞及其它免疫細(xì)胞。M細(xì)胞是一種扁平上皮細(xì)胞, SIV與M細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)合后,進(jìn)入到細(xì)胞漿形成吞飲小泡而被消化，然后將抗原表位傳送到下層的淋巴組織中,產(chǎn)生免疫應(yīng)答[18]。SIV還能被另一種黏膜上皮細(xì)胞――抗原遞呈上皮細(xì)胞所吸收,經(jīng)MHCⅡ方式完成抗原遞呈,并在CD4+T細(xì)胞的參與下誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體[19],黏膜中B細(xì)胞產(chǎn)生的免疫球蛋白以IgA為主。肌肉注射接種也能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生高水平的體液免疫應(yīng)答,保護(hù)機體免于肺組織損傷,但一般不能提高呼吸道黏膜中IgA的效價[20]。

??? 3.2 豬流感疫苗

??? 長期以來豬流感的免疫在世界各國都沒有引起足夠的重視,然而到了20世紀(jì)90年代中期,豬呼吸道疾病綜合征的發(fā)生和流行改變了這一事實。PRRS和PRDC的發(fā)生給許多豬場造成了嚴(yán)重的損失,各國廣泛開始了SIV疫苗的研究和應(yīng)用。目前市場上使用的SIV疫苗都是滅活苗,有單價苗和H1N1與H3N2雙價苗。為了得到長期持續(xù)的免疫效果,國內(nèi)外的許多科研機構(gòu)都在進(jìn)行豬流感基因工程苗的研究。研究發(fā)現(xiàn)H3N2的HA中第92位～105位,127位～133位和183位～195位氨基酸是有效的抗原表位,利用這３段抗原表位的重復(fù)序列制備的合成肽疫苗免疫小鼠和家兔,都得到了高效價的抗血清,并且能夠抑制SIV在MDCK細(xì)胞系上的蝕斑形成[21]。用腺病毒作載體表達(dá)HA、NP的基因工程苗也已構(gòu)建成功, 能快速促進(jìn)機體產(chǎn)生免疫,對３周齡以內(nèi)的仔豬有很好的保護(hù)作用,這種疫苗特別適用于缺乏母源抗體保護(hù)的仔豬[22]。脂質(zhì)體包囊的編碼HA的DNA疫苗經(jīng)呼吸道接種時, 能夠誘導(dǎo)IgA、IgG體液應(yīng)答,而且增加氣管內(nèi)IgA效價[20]。為了強化疫苗的免疫效果,應(yīng)該在疫苗中加入一定的免疫佐劑。IL-1能加強IgM應(yīng)答和CD4+ T細(xì)胞的增殖,緩解SIV感染的肺部急性炎癥、增加病畜的存活率[23]。以干擾素為黏膜佐劑時SIV疫苗不僅能夠提供長期持續(xù)的特異性免疫,還能增加鼻黏膜層內(nèi)巨噬細(xì)胞的比例,這可能是I型干擾素所表現(xiàn)的一種新的作用機制[24]。當(dāng)今世界流行的SIV主要以H1N1和H3N2為主,在許多地方H1N2作為一個新亞型也時有發(fā)生。同時用這2個亞型的疫苗免疫豬群對H1N2亞型SIV感染有交叉保護(hù)作用[25]。小豬呼吸道疾病綜合征通常發(fā)生在14周齡～17周齡,我們習(xí)慣上稱為18周齡墻。為了使豬群保持均一、整齊的抗體水平,通過母源抗體獲得保護(hù)不失為一種有效途徑。