氨甲環(huán)酸又名傳明酸、凝血酸、止血環(huán)酸，化學(xué)名反-4-氨甲基環(huán)己烷甲酸，是具有溶酶作用的藥物成分。近年來，由于某知名牙膏中添加氨甲環(huán)酸事件，使得其走進(jìn)大眾視野，作為止血藥物被公眾認(rèn)知。因其出色的止血效果氨甲環(huán)酸在醫(yī)學(xué)上多應(yīng)用于外科手術(shù)止血及創(chuàng)傷出血，隨著在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，人們發(fā)現(xiàn)它還有一個(gè)有趣的“副作用”，那就是美白祛斑。有實(shí)驗(yàn)證明，不僅口服含氨甲環(huán)酸的藥物對(duì)黃褐斑有治療效果，其外用對(duì)色斑仍有效果［1］?，F(xiàn)如今，在化妝品領(lǐng)域，氨甲環(huán)酸作為一種普遍使用的美白劑，已被多國(guó)允許使用在化妝品中，例如歐洲、美國(guó)等。我國(guó)在《已使用化妝品原料目錄（2015 版）》中也將氨甲環(huán)酸列入允許使用的范圍，這更加推動(dòng)了其發(fā)展，在資生堂、歐萊雅等知名品牌以及公眾熟知的國(guó)產(chǎn)美白類化妝品中都有添加，屬于常見美白成分。

氨甲環(huán)酸的美白機(jī)制在于可與體內(nèi)酪氨酸酶競(jìng)爭(zhēng)，影響酪氨酸酶對(duì)酪氨酸催化作用的代謝，進(jìn)而抑制酪氨酸酶的活性，或者抑制纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶。酪氨酸酶與纖溶酶都是黑色素細(xì)胞生成黑色素的重要酶，氨甲環(huán)酸通過以上兩種途徑減少或抑制黑色素細(xì)胞產(chǎn)生黑色素，從而改善皮膚色素沉積，達(dá)到美白淡斑效果［2-6］。國(guó)內(nèi)外有許多文獻(xiàn)已經(jīng)驗(yàn)證了氨甲環(huán)酸的美白效果，加之媒體、網(wǎng)絡(luò)等廣泛傳播，其中不乏有將氨甲環(huán)酸奉為“美白神藥”的說辭。而氨甲環(huán)酸作為一種廣譜美白劑，并非某些博眼球的商家所鼓吹的“神藥”，苑辰等［7］在治療色素型黑眼圈時(shí)外用5%氨甲環(huán)酸的產(chǎn)品過程中，約13.8%患者出現(xiàn)一過性的刺激性的接觸性皮炎，1 例出現(xiàn)丘疹停用后好轉(zhuǎn)。另外，其關(guān)鍵品質(zhì)受有關(guān)物質(zhì)含量控制，品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)含量≤0.5%，若超出標(biāo)準(zhǔn)范圍，經(jīng)約半年后可能出現(xiàn)產(chǎn)品發(fā)黃現(xiàn)象。因此，有關(guān)物質(zhì)含量控制對(duì)產(chǎn)品品質(zhì)保障尤為關(guān)鍵［8］。

綜上所述，用于化妝品中氨甲環(huán)酸的含量控制是用妝安全的重要環(huán)節(jié)，應(yīng)控制在安全有效的范圍內(nèi)，并非越高越好，同時(shí)需要警惕不法商家虛假標(biāo)注，誤導(dǎo)消費(fèi)的情況。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過對(duì)不同基質(zhì)美白化妝品提取檢測(cè)，建立高效、快速、靈敏的HPLC-MS/MS檢測(cè)方法，為百姓用妝安全、執(zhí)法監(jiān)管提供技術(shù)支撐。

測(cè)試方法
2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
精密稱取氨甲環(huán)酸標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg，置100 mL容量瓶中，用超純水溶解稀釋定容至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，備用。（該溶液4 ℃下保存期為30 d）。再準(zhǔn)確移取適量的上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶，制備成標(biāo)準(zhǔn)使用中間液備用。分別吸取適量標(biāo)準(zhǔn)使用中間液置于10 mL 容量瓶中，用80%甲醇配制成5、10、20、30、40 和50 ng/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，于4 ℃條件下儲(chǔ)存。

2.2 樣品前處理
取樣品0.25 g，精密稱定，置25 mL 具塞比色管中，加40%乙腈水溶液20 mL，渦旋至樣品完全分散，超聲15 min，冷卻至室溫后用40%乙腈水溶液定容至25 mL，搖勻，以5 000 r/min 離心5 min，上清液過0.22 μm 濾膜，備用。

2.3 儀器條件
2.3.1 液相色譜條件 Agilent XDB-C18 色譜柱（4.6 mm×50 mm，1.8 μm）；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：2 μL；流動(dòng)相：A（水）∶B（甲醇）=80∶20；流速：0.4 mL/min。

2.3.2 質(zhì)譜條件 離子源：ESI 源；掃描方式：正離子模式掃描；掃描范圍：100～1 000 m/z；噴霧電壓：4 500 V；干燥氣溫度：450 ℃；干燥氣流速：1 000 L/h；離子源氣體1∶60.0 psi；離子源氣體2∶55.0 psi；氣簾氣：20.0 psi；碰撞氣：6 psi；入口電壓：10.0 V；質(zhì)譜采集參數(shù)見表1。

結(jié)果與討論
3.1 色譜條件的選擇
試驗(yàn)考察了40%甲醇-水、50%甲醇-水、60%甲醇-水、80%甲醇-水以及40%乙腈-水、50%乙腈-水、60%乙腈-水、80%乙腈-水作為流動(dòng)相體系時(shí)對(duì)目標(biāo)物的色譜分離情況。結(jié)果表明：以甲醇-水體系、乙腈-水體系為流動(dòng)相時(shí)，氨甲環(huán)酸目標(biāo)峰均可有效分離，尤其是使用80%甲醇-水溶液時(shí)，目標(biāo)峰峰形尖銳對(duì)稱，響應(yīng)信號(hào)強(qiáng)度*高，在2 min 內(nèi)可以完成出峰且無干擾峰出現(xiàn)。

3.2 質(zhì)譜條件的選擇
本試驗(yàn)采用快速液相色譜-API 4000 串聯(lián)質(zhì)譜儀分析系統(tǒng)，ESI 離子源，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)中，對(duì)質(zhì)譜的采集模式（Positive 與Negative），質(zhì)譜的采集條件包括錐孔電壓（Cone）、去簇電壓（DP），選擇提取離子（定性離子和定量離子）及其碰撞能量（CE）等進(jìn)行了充分優(yōu)化，獲得優(yōu)化結(jié)果。

3.3 提取溶劑的選擇
氨甲環(huán)酸*性較強(qiáng)，在水中易溶，適合用一定比例水溶液進(jìn)行提取，本實(shí)驗(yàn)分別考察甲醇、乙腈、乙醇在不同比例（20%、40%、80%）情況下對(duì)樣品的提取效果。結(jié)果表明，氨甲環(huán)酸回收率均在80.4%～118.5%之間，其中40%乙腈作為提取溶劑時(shí)，低、中、高水平添加回收率在95.4%～97.6%之間，*接近****，且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%，選擇40%乙腈作為提取溶劑效果*佳。

3.4 線性關(guān)系
實(shí)驗(yàn)考察氨甲環(huán)酸的線性行為，精密吸取濃度范圍為5～50 μg/L 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，記錄峰面積，以質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示：氨甲環(huán)酸在5～50 μg/L 范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系，線性回歸方程為Y=4 761.3X+4 134.2，線性相關(guān)系數(shù)r=0.999 9。

3.5 基質(zhì)效應(yīng)考察
實(shí)驗(yàn)選擇市售6 種不同基質(zhì)、不含目標(biāo)物質(zhì)的美白化妝品，分別為霜、水、乳、精華、膏、面膜，以不同基質(zhì)樣品待測(cè)溶液配制氨甲環(huán)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和用80%甲醇作為稀釋劑配制氨甲環(huán)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，比較上述標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)譜相應(yīng)情況。基質(zhì)效應(yīng)（ME）的計(jì)算等于基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液與對(duì)應(yīng)濃度的80%甲醇溶液配制氨甲環(huán)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)譜響應(yīng)百分比減去100，若結(jié)果為負(fù)值，則為基質(zhì)抑制，若結(jié)果為正值，則為基質(zhì)增強(qiáng)［9］。結(jié)果顯示：上述6 種不同基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液基質(zhì)效應(yīng)增強(qiáng)或抑制效果均不明顯（-5.3%～1.8%），與80%甲醇溶液配制標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)譜響應(yīng)基本一致，因此認(rèn)為該方法基本不存在基質(zhì)效應(yīng)。

3.6 回收率試驗(yàn)與精密度
分別選取美白爽膚水、美白乳、美白霜、美白精華、美白面膜、美白潔面膏六種類型陰性產(chǎn)品，按照試驗(yàn)方法分析，并進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)。設(shè)定高、中、低添加水平，平行試驗(yàn)6 份。記錄待測(cè)物色譜峰面積，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。結(jié)果表明，建立的方法對(duì)不同基質(zhì)美白化妝品具有良好的回收率，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%。
選取目標(biāo)物質(zhì)含量為6.35 μg/g 的陽(yáng)性樣品，按照實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)測(cè)定6 次，計(jì)算精密度，結(jié)果表明，陽(yáng)性樣品含量為6.35 μg/g（氨甲環(huán)酸檢出），RSD 值為0.5%。取陰性樣品6 份，加入氨甲環(huán)酸對(duì)照品溶液（0.1 μg/g）按試驗(yàn)方法測(cè)定，計(jì)算精密度，結(jié)果表明，樣品含量為0.098 μg/g，RSD 值為1.2%。試驗(yàn)結(jié)果表明，方法精密度良好，滿足實(shí)驗(yàn)要求。

3.7 檢出限與定量限
取不含目標(biāo)物質(zhì)的陰性樣品適量，精密稱定，加入不同體積的氨甲環(huán)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照試驗(yàn)方法測(cè)定，選擇3 倍信噪比（S/N=3）時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為儀器檢出限，選擇10 倍信噪比（S/N=10）時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為定量限。本方法氨甲環(huán)酸的檢出限為0.1 μg/kg，定量限為0.3 μg/kg。

3.8 實(shí)際樣品分析
隨機(jī)選取市售美白類化妝品48 批，其中包含美白乳液10 批、美白面霜10 批、美白潤(rùn)膚水7 批、美白精華10 批、美白面膜5 批、美白潔面膏6 批。按試驗(yàn)方法進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：陰性樣品分析未見干擾成分，各品類均有陽(yáng)性樣品檢出，檢出率高達(dá)27.1%，檢出含量范圍在0.02～1 231.60 mg/kg之間。含量較高類別為精華類，面霜類、乳液類、面膜類、潤(rùn)膚水、潔面膏含量差異較小，低于精華類。可見，氨甲環(huán)酸作為一種美白劑被廣泛用于化妝品中，可能是美白祛斑功效的核心成分。

結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)研究建立了美白化妝品中氨甲環(huán)酸的HPLC-MS/MS 測(cè)定方法，通過優(yōu)化液相方法和前處理方法實(shí)現(xiàn)了有效避免樣品測(cè)試中的基質(zhì)效應(yīng)、解決雜質(zhì)干擾問題。方法準(zhǔn)確可靠、易于操作、檢測(cè)周期短、回收率高，為美白類化妝品中氨甲環(huán)酸的監(jiān)管工作提供技術(shù)手段。