化妝品含有多種營養成分，適宜微生物生長繁殖。細菌、霉菌等微生物含量的超標是國家監督抽查化妝品常出現的質量問題?；瘖y品微生物是影響化妝品衛生安全的重要指標，其中霉菌是化妝品微生物檢驗中的一項重要指標。霉菌總數是指化妝品檢樣在一定條件下培養后，1 g或1 mL化妝品中所污染的活的霉菌的總數，是判明化妝品是否被霉菌污染的重要指標。化妝品的霉菌污染不僅會影響產品本身的質量，更嚴重的會影響使用者的健康，例如導致皮膚癬癥等。自從我國頒布了化妝品衛生標準以及出臺了化妝品衛生監督管理條例，加強了衛生監督和檢測，我國化妝品微生物污染率明顯下降，但污染情況仍時有發生。2019～2021年本實驗室日常檢驗化妝品共4 607份，檢出霉菌污染超標22份，超標率為0.478%。因此，對化妝品中霉菌總數進行測量不確定度的評定，是實驗室內部質量控制的一部分，對提供準確的數據具有重要意義。

1 材料與方法
1.1 材料和試劑
黑曲霉CMCC98003購于環凱生物有限公司、虎紅瓊脂培養基(批號J1578Y)購于環凱生物有限公司。

1.2 實驗方法
化妝品加標處理：每個測試樣品加入適當數量的黑曲霉菌，并充分混勻樣品。
化妝品檢驗：在實驗室由3名檢測人員按照《化妝品安全技術規范》(2015年版)第五部分微生物檢驗方法[2]，同時進行一段時間測試，檢驗化妝品中的霉菌總數指標。檢測人員在局部百級的潔凈室進行操作，分別從兩個包裝完整的樣品中共取樣10 g，并用生理鹽水進行10倍的倍比稀釋，分別得到 1∶10、1∶100、1∶1 000的檢液。每個稀釋度分別吸取1 mL檢液至滅菌平皿中，加入虎紅培養基并充分搖勻，置28±2 ℃培養5 d，每個樣品均做平行樣，同時做空白對照。計算結果時，選取菌落數在5～50個范圍內的平皿進行霉菌總數的計數。

2 結果與分析
2.1 不確定度來源的確定與分析
化妝品檢測步驟主要包括樣品稱量、稀釋、均質、加樣、混勻、培養、平皿計數和結果修約等[3]。整個試驗由3名檢測人員對相同的7份樣品同一時間進行平行檢測，由于微生物檢驗的結果分散性較大，影響因素非常多，檢測過程引入的不確定度主要有樣品的稱量、樣本稀釋、培養條件和不同檢測人員的重復性檢測，其中后續培養過程條件相對固定，其引入的不確定度可忽略不計。

2.2 測量不確定度的評定方法
不確定度的評定一般分為測量不確定度的A類評定(隨機效應引起的)和測量不確定度的B類評定(系統影響引起的)，均用標準偏差表征。本實驗是對不同7份樣品同一時間由實驗室3名技術人員進行平行檢驗的霉菌總數的檢驗數據，在重復性和重現性試驗的基礎上進行不確定度的A類評定更為客觀，并具有統計學的嚴格性。除此之外，還需要考慮稱量及加樣時使用的儀器和容器的示值誤差所引入的不確定度分量進行不確定度的B類評定。

2.3 不確定度計算
2.3.1 不同檢測人員重復檢測引入的不確定度
本實驗是同一時間由實驗室3名技術人員對不同7份樣品進行7次平行檢驗，每次檢驗有2個平行數據。其中，根據《化妝品安全技術規范》中所規定的霉菌總數的測定方法，得到霉菌總數的測試結果見表1。使用指數法將檢驗結果取對數，利用貝賽爾公式計算合并樣本標準偏差，計算檢驗結果的測量不確定度。

3 討論
測量不確定度是對測量結果可信性、有效性的質疑或不能肯定的程度，是說明測量結果質量的一個參數。因此正確的不確定度的評定對客觀分析測量結果有重要的意義。目前，ISO/IEC17025是國際上統一的對檢測和校準實驗室能力的通用要求[6]，其在內容和技術方面強化了對測量不確定度的評定，表明在適當時候要對測量結果的不確定度進行評定。微生物檢驗影響因素多，不同技術人員操作手法差異大，對檢驗結果有一定的影響，結果重現性較差，因此在微生物檢驗中應引入測量不確定度的評定，檢驗結果更加科學可靠。
化妝品中含有豐富的營養成分，包括脂肪、蛋白質、氨基酸、無機鹽等，一些美白祛斑類化妝品還含有維生素、熊果酸、胎盤液等功能性營養成分，適合微生物的生長[7]。因此，微生物指標超標造成產品不合格是國家監督抽查發現化妝品常出現的質量問題。但化妝品使用的防腐劑與食品中使用的相比，用量更大，抑菌作用更強，因此化妝品中微生物繁殖不如食品中嚴重，部分檢測人員對化妝品的微生物檢驗不重視，檢驗過程隨意，不嚴格按規范操作，從而造成結果偏差。眾所周知，樣品重復測定引入的不確定度主要是由不同人員操作以及操作重復性產生，因此本次試驗是由實驗室3名技術人員同一時間對不同7份樣品進行7次平行檢驗，通過計算不同人員操作及重復試驗產生的不確定度，提高檢測結果的可靠性和科學性。本次試驗結果相差較大，直接用貝塞爾公式計算標準偏差不合適，故采取將結果取對數后，用合并樣本標準差的方法求檢驗結果的不確定度[8-10]。這樣的方法更科學有效，且適用于每個樣本，不斷增加的檢驗結果，可以加入到合并樣本中，重新計算合并樣本標準差，可更新其不確定度的取值范圍，不確定度越小，測量結果質量越高，反之亦然。由本次實驗結果可見，當樣本中霉菌總數檢測結果以平行樣對數值的平均值表示時，檢驗結果取值區間分布于X±0.077之間，而獲得此次化妝品霉菌檢驗的不確定度，增加了測量結果之間的可比性。此外，霉菌檢驗結果散發性較大，檢驗過程必須嚴格按照標準規范操作，使用合格的計量器具，保證檢驗數據的準確性和可靠性。