植物酶可以提高動(dòng)物的消化功能，催化機(jī)體內(nèi)的生化反應(yīng)，促進(jìn)機(jī)體的新陳代謝，從而彌補(bǔ)因應(yīng)激等原因消化酶分泌的減少。所以很多時(shí)候，類似植酸酶、蛋白酶、纖維素酶、脂肪酶、果膠酶、淀粉酶等植物酶制劑會(huì)被作為很好的飼料添加劑，應(yīng)用在飼料產(chǎn)品的生產(chǎn)加工里面。這時(shí)候，如果企業(yè)能夠準(zhǔn)確的把握酶活性、酶反應(yīng)的相關(guān)數(shù)據(jù)就能夠更好的設(shè)計(jì)一款符合市場(chǎng)需求的畜禽飼料。

　　一、方法原理分析

　　使用分光光度法檢測(cè)植酸酶活性，原理主要是利用植酸酶在一定溫度和 pH 條件下，可以水解底物植酸鈉，從而生成正磷酸和肌醇衍生物，只要在酸性溶液中，用釩鉬酸氨處理，就會(huì)生成黃色的【( NH4) 3PO 4 NH 4 VO 3 · 16M O O 3 】復(fù)合物，然后我們用分光光度計(jì)，在波長(zhǎng) 415nm 下進(jìn)行比色測(cè)定就可以了解其酶活性。

　　二、檢測(cè)方法步驟

　　1.取有代表性樣品， 用四分法將試樣縮分至200g， 植酸酶產(chǎn)品不需粉碎， 配合飼料和添加劑預(yù)混合飼料需粉碎通過0.45mm標(biāo)準(zhǔn)篩,裝入密封容器,防止試樣成分變化。

　　2.稱取樣品5000U/g的0.4~0.6g，精確至0.0001g，置于250mL三角瓶中，準(zhǔn)確加入100mL乙酸緩沖液(2)，放到空氣浴搖床上振蕩30min或磁力攪拌器上高速攪拌30min，在離心機(jī)上以4000r/min離心10min。分取不同體積的上清液用乙酸緩沖液(2)稀釋，使樣液濃度保持在0.4U/mL左右，待反應(yīng)。建議精確移取上清液1mL至25mL容量瓶中，用乙酸緩沖液(2)定容，搖勻。再繼續(xù)精確移取1mL試液至25mL容量瓶中，定容，搖勻，稀釋至31250倍。

　　3.取10mL試管，精確移取2mL稀釋液至試管中，同時(shí)做試樣空白。將樣品放入37℃水浴鍋預(yù)熱5min，先將空白加4mL終止液(1.3.7)，再將樣與空白依次加入4mL底物植酸鈉(1.3.3)，從加底物開始，向每支試管中加入試劑的時(shí)間間隔要**一致，加液后立即混勻，將其放入37℃水浴水解30min;取出后將樣品各加入4mL終止液。

　　4.反應(yīng)后的試樣在室溫下靜置10min，如出現(xiàn)混濁需在離心機(jī)(1.4.7)上以4000轉(zhuǎn)/min離心10min，上清液以標(biāo)準(zhǔn)曲線的空白調(diào)零在分光光度計(jì)415nm波長(zhǎng)處測(cè)定樣品空白(A0)和樣品溶液(A)的吸光值，A-A0為實(shí)測(cè)吸光值，用直線回歸方程計(jì)算植酸酶的活性。

　　三、酶反應(yīng)分析

　　1.酶反應(yīng)的*適溫度

　　酶反應(yīng)的*適溫度調(diào)節(jié)恒溫水浴鍋，在不同溫度下(15~70℃)進(jìn)行酶促反應(yīng)。以*高酶活為****，其他條件下的酶活占*高酶活的百分?jǐn)?shù)即為該酶在此溫度條件的相對(duì)酶活。植酸酶作為一種酶制劑，對(duì)溫度非常敏感，溫度低會(huì)降低它的生物活性;溫度高也會(huì)降低其生物活性，甚至完全失活。植酸酶隨著溫度的增加，酶活呈上升趨勢(shì)，到55℃左右酶活達(dá)到*高，溫度超過55℃后酶活開始下降，通過檢測(cè)，該酶的*適反應(yīng)溫度為55℃。

　　2.酶反應(yīng)的*適pH值

　　配制0.1mol的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，在不同的pH值((1.0~7.0)下進(jìn)行酶促反應(yīng)。以*高酶活為****，其他條件下的酶活占*高酶活的百分?jǐn)?shù)即為該酶在此pH條件的相對(duì)酶活。通過檢測(cè)可知，植酸酶的*適pH值在4.0左右。pH值在2.5~5.5.能保持70%以上的酶活，該酶有較寬的pH適宜范圍，可以在消化道內(nèi)充分發(fā)揮作用。

　　3.底物濃度對(duì)酶活的影響

　　配制不同反應(yīng)濃度(0.1~5.0mmol/L)的底物，在常規(guī)條件下測(cè)定酶活，以*高酶活為****，在其他條件下的酶活，占*高酶活的百分?jǐn)?shù)即為該酶在此底物濃度下的相對(duì)酶活。隨著底物濃度的增加酶活逐漸上升，當(dāng)?shù)孜餄舛茸銐虼髸r(shí)，酶全部被底物所飽和，此時(shí)反應(yīng)速度達(dá)到*大值。隨著底物濃度的增加，樣品空白的本底值逐漸增大，會(huì)影響酶活的測(cè)定。

　　四、總結(jié)

　　通過分光光度計(jì)法檢測(cè)，我們可以了解到該酶制劑樣品的*適反應(yīng)溫度為 55℃;*適反應(yīng)pH值為4.0.酶活的測(cè)定在飼料用酶制劑產(chǎn)品的質(zhì)量檢驗(yàn)、產(chǎn)品標(biāo)簽和酶活保證方面是必不可少的項(xiàng)目， 而酶活的測(cè)定是一種非常細(xì)致的工作，所以，我們一定要找準(zhǔn)依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)，深刻理解影響酶制劑酶活測(cè)定的主要因素，正確把握各影響因素的關(guān)鍵點(diǎn)，從而才能為企業(yè)篩選優(yōu)質(zhì)酶制劑、確定復(fù)合酶制劑的*佳組方及確定產(chǎn)品的*佳添加量等提供更好的數(shù)據(jù)支撐。