作者:百檢網 時間:2022-07-19 來源:互聯網
皮膚細胞培養技術可模擬人體內的生理環境,研究細胞與細胞之間的反應,細胞與間質之間的反應等,具有快速、經濟的特點,既可用來毒性分析,也可進行功效評價,是保證化妝品安全、有效的必要手段,為皮膚生理學等提供了技術基礎。
一、人永生化角質細胞(Human immortalized keratinocytes,HaCaT 細胞)
角質形成細胞(KC)的體外培養技術已經十分成熟,其生長較快、細胞存活率較高,但也易老化且傳代次數較少,所以在化妝品功效評價中通常會使用HaCaT細胞(即非腫瘤來源的永生化人正常皮膚的KC株,與KC分化特性相似,具有易于培養、傳代次數多的優點)。
1、HaCaT細胞應用于保濕功效評價
HaCaT細胞可合成透明質酸(Hyaluronic acid,HA)、水通道蛋白(Aquaporin,AQP)、緊密連接蛋白(Tightjunction protein,TJP)以及絲聚蛋白(Filaggrin,FLG)等與皮膚保濕相關的生物分子。因此,可以通過檢測化妝品原料對HaCaT細胞中AQP、claudin-1(claudin-1是TJP中形成表皮細胞旁屏障的主要跨膜蛋白)和FLG等保濕相關蛋白含量的影響來反映其保濕能力,對保濕化妝品進行功效評價。不過現在進行保濕功效測試一般會通過人體試驗的方法,這樣更直觀一些,HaCaT細胞測試可用于研究原料的保濕機理。
2、HaCaT細胞應用于抗氧化功效評價
活性氧(ROS)過量會對DNA和蛋白質產生氧化損傷;丙二醛(MDA)是生物體內自由基作用于脂質發生過氧化反應的終產物。因此,通過檢測其中HaCaT細胞內ROS和MDA的含量變化可反映出細胞內氧化應激的水平, 評價化妝品原料的抗氧化能力。超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPX)可用于用于清除或降低氧自由基造成的損傷。因此,通過檢測SOD、CAT和GSHPX的活力,可反映化妝品原料對HaCaT細胞內自由基的清除能力的影響,以此來評價化妝品原料的抗氧化能力。例如,王茵等人通過測量小鼠肝臟組織的抗氧化酶系統活性(SOD,GSHPX,AOC(總抗氧化能力),MDA,NO(一氧化氮))來研究蝦青素的抗氧化效果。*終結果顯示蝦青素可提高小鼠肝臟和血液中的SOD,GSHPX,AOC等活性指標,降低MDA和NO的濃度,即蝦青素具有抗氧化能力。
二、小鼠B-16黑色素瘤細胞(簡稱B-16細胞)
黑素細胞(Melanocyte,MC)是皮膚內的一種特殊細胞,它位于表皮的基底層,細胞內的黑素小體(Melanosomes)能合成黑色素(Melanin),并轉移到周圍的角質形成細胞中,為皮膚提供顏色。但是黑素細胞的增殖比較緩慢,所以常用B-16細胞代替黑素細胞進行細胞實驗。(B-16細胞在基本結構與黑色素合成功能方面與人黑素細胞基本相同,且增殖能力更強,能夠多次傳代,適合用于實驗研究)。B-16細胞可應用于美白功效評價,例如馬佳等研究了壬二酸對人表皮黑素細胞和鼠黑素瘤B16細胞黑素合成的影響。與空白對照組比較 0.1 mmol//L壬二酸即顯示抑制人表皮黑素細胞的酪氨酸酶活性和黑素的合成,同等濃度的壬二酸對鼠黑素瘤B16細胞的酪氨酸酶活性和黑素合成也有抑制作用。
三、人皮膚成纖維細胞(Human skin fibroblast,HSF)
HSF是皮膚真皮層中*主要的細胞,對于維持皮膚的彈性和張力具有重要的作用。HSF具有很強的蛋白質合成能力,可以合成并分泌大量彈性蛋白、膠原蛋白、糖胺多糖和糖蛋白等基質成分,進而生成彈性纖維、膠原纖維和網狀纖維,分泌多種細胞修復因子,使得皮膚具有強大的更新與自我修復能力。人皮膚成纖維細胞可應用于抗衰老功效評價,例如鄭雯等研究了白藜蘆醇對UVB照射的人皮膚成纖維細胞基質金屬蛋白酶(MMP-1)水平及細胞凋亡的影響,即白藜蘆醇對紫外線照射皮膚的光保護作用。結果表明白藜蘆醇能通過抑制UVB照射所造成的人皮膚成纖維細胞MMP-1水平增長,使皮膚真皮組織膠原蛋白的分解減少,從而延緩紫外線照射對皮膚造成的損傷和老化進程。
四、人角質形成細胞(HKC)
人角質形成細胞系一種能合成角質蛋白的上皮細胞。此類細胞為表皮的主體,由表皮深層始逐漸增殖、分化,并不斷向表層移行,其間可分成幾個層次,表皮*深層為基底層,向上依次為棘層、顆粒層、角質層,角質蛋白亦依生長層次逐漸合成。人角質形成細胞是表皮中*重要的細胞之一,它可以反映表皮的健康狀態,所以也有大量的研究人員將它應用于化妝品原料的研究與應用,例如王剛等通過實驗證實阿魏酸是通過影響HKC下游炎癥因子如TNF-α和IL-8分泌,從而參與調節免疫反應的信號傳導機制,達到對HKC的保護作用。
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