飼料微生物檢測項(xiàng)目及方法
作者：百檢網(wǎng) 時間：2022-08-11 來源：互聯(lián)網(wǎng)
目前我國大部分飼料檢測時，采樣執(zhí)行的國家標(biāo)準(zhǔn)為《GB/T 14699.1-2005 飼料 采樣》，但是GB/T 14699.1中也明確規(guī)定了該標(biāo)準(zhǔn)不適用飼料的微生物檢驗(yàn)。之所以不適用微生物檢驗(yàn)，那是因?yàn)樵摌?biāo)準(zhǔn)主要考慮到了微生物指標(biāo)的偶發(fā)性和均一性特點(diǎn)。其他類似國標(biāo)GB 4789. 18《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 乳與乳制品檢驗(yàn)》等相關(guān)行業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)，雖然也有專門針對本領(lǐng)域產(chǎn)品的微生物采樣標(biāo)準(zhǔn)，但是也都沒有包含飼料產(chǎn)品。如果我們在采集樣品時，不能采集到具有真實(shí)性和代表性的樣品，那么檢測結(jié)果就無法客觀地反映該批次產(chǎn)品的質(zhì)量水平，漏檢和誤檢不可避免，從而直接影響檢測報(bào)告的準(zhǔn)確性和權(quán)威性。
一、飼料微生物檢測項(xiàng)目
微生物污染物的檢測項(xiàng)目主要有細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)及沙門氏菌。
1.細(xì)菌總數(shù)
細(xì)菌總數(shù)一般通過菌落總數(shù)來表示, 即在 30℃的條件下培養(yǎng) 72h 后, 普通營養(yǎng)瓊脂平板上出現(xiàn)細(xì)菌的菌落總數(shù)。 菌落總數(shù)代表飼料衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣。
2.霉菌
霉菌作為飼料對飼料安全造成危害的主要微生物類群, 其含量高低直接代表飼料對動物健康危害性的高低。
3.沙門氏菌
沙門氏菌容易引起動物傷寒、 副傷寒及急性胃炎的發(fā)生。
二、飼料微生物檢測方法
1.瓊脂平板培養(yǎng)法
瓊脂平板法是多年來我國微生物檢測的主要方法, 即在瓊脂平板上培養(yǎng)后, 通過菌落情況來判斷微生物含量, 這種方法通常需要 2——3d 才能完成, 費(fèi)時、 費(fèi)力而且復(fù)雜。
2.電阻電導(dǎo)測定法
細(xì)菌在生長繁殖過程中, 可以將培養(yǎng)液中蛋白質(zhì)及糖類等大分子物質(zhì)進(jìn)行有效分解, 形成氨基酸及有機(jī)酸等小分子物質(zhì), 從而使培養(yǎng)液的導(dǎo)電度發(fā)生改變。 通過測量培養(yǎng)液電阻及導(dǎo)電度的變化, 即可以得到樣品含菌量。
3.ATP 檢驗(yàn)法
ATP 檢驗(yàn)法就是將 ATP 檢驗(yàn)儀與計(jì)算機(jī)相連后, 通過計(jì)算機(jī)將 ATP 檢驗(yàn)儀的檢驗(yàn)結(jié)果顯示出來。 其檢驗(yàn)原理為: 任何生命體種均含有 ATP, 通過熒光酶、 熒光物質(zhì)或者氧及鎂離子ATP 發(fā)出的光量與 ATP 含量成正比, 通過光量既可以得到飼料各種微生物的含量。
4.PCR 技術(shù)
PCR 技術(shù)主要通過對微生物 DNA 或者 RNA 片段進(jìn)行擴(kuò)增, 檢測其擴(kuò)增產(chǎn)物, 得到飼料中致病菌的含量。
5.基因探針法
基因探針能夠?qū)μ禺悏A基序列中一段單鏈 DNA 或者 RNA分子進(jìn)行識別。 標(biāo)記后的基因探針與靶細(xì)胞雜交后, 通過對雜交產(chǎn)物進(jìn)行檢測即可得到微生物含量。
三、飼料微生物采樣方案
我們檢驗(yàn)飼料微生物指標(biāo)時，采樣前應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康摹悠诽攸c(diǎn)、批量、檢驗(yàn)方法、微生物特性等確定采樣方案。采樣方案應(yīng)包括但不限于采樣目的、人員、人數(shù)、范圍、地址以及樣品的份數(shù)和采樣量等。采樣人員、樣品的份數(shù)和采樣量要根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康摹悠诽攸c(diǎn)、批量、檢驗(yàn)方法、微生物的特性等確定。
樣品數(shù)量及份樣數(shù)
樣品量和份樣數(shù)應(yīng)根據(jù)GB/T14699.1要求執(zhí)行，或根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)際樣品的特點(diǎn)確定。用于細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)及益生菌檢測的樣品，每個樣品的份樣數(shù)不少于5個，對于需要檢驗(yàn)沙門氏菌等致病菌的樣品，份樣數(shù)不少于8個。每份樣品的總采樣量應(yīng)滿足微生物指標(biāo)檢驗(yàn)的要求，一般固體樣品不少于500g，液體樣品不少于500mL。
采樣步驟
1.采樣應(yīng)盡可能在潔凈區(qū)進(jìn)行，沒有潔凈條件的應(yīng)盡可能選擇少塵、非生產(chǎn)的區(qū)域。
2.采樣必須遵循無菌操作原則。預(yù)先準(zhǔn)備好的無菌采樣工具（設(shè)備）和容器必須在采樣時方可打開。非獨(dú)立包裝樣品采樣時應(yīng)兩人操作，一人負(fù)責(zé)采樣，另一人負(fù)責(zé)打開盛放樣品容器、密封和包裝等。
3.應(yīng)從未開封的包裝內(nèi)采樣。確認(rèn)樣品的批號、生產(chǎn)日期、保質(zhì)期等信息，確保包裝無破損且在
保質(zhì)期內(nèi)。
4.每份樣品的總采樣量應(yīng)滿足微生物指標(biāo)檢驗(yàn)。
5.每采集一個樣品，需要更換一次無菌手套、采樣工具等。
四、不同形態(tài)樣品采樣注意事項(xiàng)
1.固體樣品
1.1 獨(dú)立包裝小于或等于1000 g的， 可隨機(jī)抽取一個完整包裝或同一批*小零售包裝； 獨(dú)立包裝大于1000 g的， 應(yīng)用無菌采樣釬、 采樣鏟或采樣勺等從同一包裝的不同部位（ 表層、 中間和底層） 分別采取不少于25 g樣品， 放入同一個無菌采樣容器內(nèi)作為一份飼料樣品， 直到檢測前不要開封， 以防污染。
1.2 桶裝或大包裝固體樣品， 應(yīng)用無菌采樣器由幾個不同部位采取不少于25 g樣品， 放入同一個滅菌容器內(nèi)， 使之有充分的代表性。
1.3 冷凍樣品應(yīng)保持冷凍狀態(tài)采樣。
1.4 散裝固體樣品可用無菌采樣鏟、 采樣勺或采樣器采樣； 固體粉末樣品， 應(yīng)邊混合邊采樣。 每件樣品的采樣量應(yīng)滿足微生物指標(biāo)檢驗(yàn)單位的要求。
2.半固體樣品
2.1 對以儲罐運(yùn)輸和儲存的產(chǎn)品， 可使用適當(dāng)?shù)摹?能沿對角線插至罐底部的工具取樣， 至少在3個深度采取份樣, 如可能， 在儲罐的整個截面采集份樣。 采樣后， 用部分該產(chǎn)品將采樣孔封好。
2.2 如果不能混合， 也不能在產(chǎn)品的流動中采樣， 則每隔30 cm采一個份樣， 所采每個份樣的量應(yīng)與該特定深度處罐的橫截面積成比例。
3.液體樣品
3.1 獨(dú)立包裝小于或等于1000 mL的， 可隨機(jī)采取一個完整包裝或同一批多個完整包裝； 獨(dú)立包裝大于1000 mL的， 應(yīng)在采樣前搖動或用無菌棒攪拌液體， 使其達(dá)到均質(zhì)后采集適量樣品， 放入同一個無菌采樣容器內(nèi)作為一份飼料樣品。 直到檢測前不要開封， 以防污染。
3.2 有活塞的瓶裝液體在采樣前， 應(yīng)先用無菌棒攪拌均勻， 用75%酒精棉球?qū)⒉蓸娱_口處周圍擦拭消毒， 然后打開塞， 將內(nèi)容物倒出一些后， 再用無菌工具采集樣品。
3.3 桶裝或大容器包裝的液體樣品在采樣前搖動或用無菌棒攪拌液體， 使其均勻。 采樣時應(yīng)先將采樣管浸入液體內(nèi)略加漂洗， 然后用洗耳球吸取所需量的樣品。
3.4 散裝液體樣品通過振搖或攪拌混勻用無菌玻璃吸管采樣，樣品取出后， 將其裝入無菌樣品容器，在酒精棉球消毒后加蓋密封。 每件樣品的采樣量應(yīng)滿足微生物指標(biāo)檢驗(yàn)單位的要求。
注： 樣品容器里的裝樣量不得超過其總?cè)萘康乃姆种?便于檢測前將樣品搖勻。
4.流水線樣品
4.1 根據(jù)樣品傳送的速度及采樣量， 確定合適的采樣頻率。 用采樣鏟或自動采樣器在流水線的某一截面采樣。
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