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農(nóng)業(yè)植物纖維戊聚糖含量測(cè)定方法

作者:百檢網(wǎng) 時(shí)間:2022-08-11 來(lái)源:互聯(lián)網(wǎng)

戊聚糖是植物纖維原料檢測(cè)中的非淀粉多糖之一,在谷物加工過(guò)程,也是影響產(chǎn)品品質(zhì)的重要功能性成分。在生理功能上,戊聚糖具有潤(rùn)腸通便、降血糖、降血脂、增強(qiáng)免疫、減肥和降低結(jié)腸癌風(fēng)險(xiǎn)等作用,尤其是在對(duì)腸道菌群中相關(guān)水解酶的代謝起到抑制作用,所以戊聚糖可以發(fā)展成為慢發(fā)酵型潛在益生元,在保健功效上具有一定研究?jī)r(jià)值,此外戊聚糖還作為增稠劑和保濕劑,應(yīng)用在冰淇淋、飲料、調(diào)味品、乳制品等食品行業(yè)。

檢測(cè)方法的選擇


1、色譜法:色譜法有液相色譜法、氣相色譜法和陰離子交換色譜法, 其基本原理是先將聚糖水解成單糖, 氣相色譜法還要將水解的單糖進(jìn)行衍生化,制備成揮發(fā)性的單糖衍生物, 然后通過(guò)分離和檢測(cè)裝置測(cè)定各種單糖的濃度。 色譜法測(cè)量精度高, 特別是陰離子交換色譜法已廣泛用于測(cè)量植物原料和紙漿中的各種單糖含量, 但由于色譜儀價(jià)格昂貴,所以檢測(cè)成本較高,這也是為什么該研究院找到我們檢測(cè)的原因之一。

2、比色法: 比色法有二羥基甲苯-三氯化鐵分光光度法、苯胺醋酸溶液分光光度法和間苯三酚分光光度法等方法, 比色法的基本原理是將聚戊糖水解成單糖, 然后進(jìn)一步脫水生成糠醛, 糠醛再與顯色劑作用形成有色物質(zhì), 通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定特定波長(zhǎng)下的吸光強(qiáng)度, 再通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出聚戊糖的含量。

經(jīng)過(guò)比對(duì),我們決定對(duì)植物源產(chǎn)品進(jìn)行酶解后,以鹽酸羥胺,吡啶和醋酸酐為衍生試劑進(jìn)行樣品衍生,以氣質(zhì)聯(lián)用儀為檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行測(cè)定。在對(duì)酶解和水解方案的選擇和衍生方法確定,我們也對(duì)酸解和酶解方案進(jìn)行了對(duì)比實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,酶解方案的穩(wěn)定性優(yōu)于酸解,同時(shí)在樣本保存方面,酶解方案更優(yōu),因此選擇酶解方案作為樣本前處理法。實(shí)驗(yàn)并也對(duì)衍生方法和衍生條件進(jìn)行優(yōu)化。經(jīng)過(guò)對(duì)各個(gè)重點(diǎn)環(huán)節(jié)進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn),*終確定*優(yōu)方案。

主要試驗(yàn)步驟


1.試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)設(shè)計(jì)分成平行試驗(yàn)和空白實(shí)驗(yàn)。平行試驗(yàn)的所有樣品平行做兩份試驗(yàn)??瞻讓?shí)驗(yàn)不加試樣,用于衍生化試驗(yàn)。每批樣品(少于20個(gè))或每20個(gè)樣品做一個(gè)空白試驗(yàn)

2.酶解

準(zhǔn)確量取液態(tài)樣品0.5mL,或稱取固態(tài)樣品50mg于25mL的蒸餾水(pH=6.0)中,攪拌至完全溶解。稱取6.0mg木聚糖酶,溶解于5mL蒸餾水中,待酶溶解后加入到戊聚糖樣品溶液,40℃水浴加熱振蕩反應(yīng)50min。樣品冷凍干燥,待衍生。

3.衍生化

待衍生物加入10.0 mg鹽酸羥胺,0.5 mL吡啶,振蕩溶解,移入烘箱,90℃反應(yīng)30 min,取出冷卻至室溫。加入0.5 mL醋酸酐,于90℃烘箱反應(yīng)30 min。衍生化后溶液加入甲醇定容,溶液搖勻后過(guò)有機(jī)濾膜,濾液待上機(jī)測(cè)定。

4.測(cè)定及繪制曲線

采用逐級(jí)減少的方法稱取阿拉伯糖和木糖單糖,并進(jìn)行衍生化實(shí)驗(yàn)。衍生化后溶液用于氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行定量分析。根據(jù)所用氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀的性能及待測(cè)試樣的實(shí)際情況選擇*佳的測(cè)試條件測(cè)定衍生化后溶液,取樣品衍生溶液1μ L注入氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀中,記錄總離子流質(zhì)譜圖和選擇離子質(zhì)譜圖,對(duì)定量選擇離子進(jìn)行峰面積積分,外標(biāo)法定量。以峰面積A為縱坐標(biāo),相應(yīng)濃度c為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,每次都應(yīng)該使用已知的校準(zhǔn)化合物對(duì)儀器進(jìn)行*優(yōu)化處理,使儀器的靈敏度、穩(wěn)定性和分離效果處于*佳狀態(tài)。

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