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狂犬病毒檢測抗體檢測方法介紹

作者:banjian77 時間:2022-10-18 來源:互聯網

  狂犬病毒檢測抗體檢測分為特異性抗體檢測和中和抗體檢測,介紹如下:

  A. 特異性抗體檢測:

  在自然感染情況下,狂犬病毒通常由被瘋動物咬傷時通過其帶有病毒的唾液進入機體傷口內,在入侵部位狂犬病毒基本上不增殖,一般也不侵入血流,故不能形成病毒血癥。因此,在感染后的一段時間內狂犬病毒或其抗原不能與機體免疫系統廣泛接觸,不能有效刺激機體產生抗狂犬病毒感染的免疫應答反應??袢〉耐砥谝蜓X屏障作用被破壞,腦內大量病毒抗原得以進入血流,可以刺激機體的免疫系統產生大量特異性抗體。因此,許多狂犬病人在發病早期血清中查不到抗體或抗體滴度很低,狂犬病特異性抗體只在臨床疾病的晚期出現。

  B. 中和抗體檢測:

  狂犬病疫苗免疫后血清中和抗體水平是測定疫苗免疫力程度的評判指標,WHO 狂犬病專家委員會認為中和抗體水平等于或高于 0.5IU/ml 血清,表示能得到有效的保護。

  狂犬病毒中和抗體的檢測可以用傳統的小鼠中和試驗或 WHO 推薦的快速熒光灶抑制試驗(RFFIT)。RFFIT 試驗時倍比稀釋已經滅活的血清樣品,同時設陰、陽性血清對照。病毒用標準固定毒 CVS 株,細胞用 BHK21 細胞系。

  **將稀釋的被檢及對照血清 0.1ml 加入 96 孔細胞培養板中,再在各血清孔中加入 0.1 m1 標準病毒稀釋液(100TCID50),37℃中和1.5 小時;

  然后每孔加入細胞,37℃、5% C02 培養過夜后棄掉培養液,PBS 洗一次,丙酮固定。

  干燥后,加熒光素標記的抗狂犬病毒抗體,37℃ 30 分鐘,PBS 洗 3 次,熒光顯微鏡觀察結果:比較實驗組和陰性血清組的熒光灶,實驗組中能使熒光灶抑制≥50%的血清*高稀釋倍數,即為被檢血清的中和抗體滴度。

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