作者:banjian77 時間:2022-10-19 來源:互聯網
植物遺傳轉化是將重組質粒導入受體基因組的過程,通常使用的策略包括農桿菌介導法、基因槍法、聚乙二醇(PEG)法和花粉管通道法等。
農桿菌介導法:世界上**例轉基因植物采取的就是此方法。根癌農桿菌和發根農桿菌屬于革蘭氏陰性菌,可廣泛侵染雙子葉植物,在一定條件下還能侵染單子葉植物。根癌農桿菌含有Ti質粒,該質粒上的T-DNA可插入到植物基因組中,誘導瘤狀物的形成。因此,將目標序列插入到T-DNA中,可通過Ti質粒的載體作用,使目標序列整合到受體基因組中并表達。具體地,農桿菌介導法又可細分為原生質體共培養法、葉盤法、創傷植物感染法等,可根據受體材料類型選擇合適的農桿菌介導法。
基因槍法:基因槍法又被稱為微彈轟擊法,其原理是將攜帶外源DNA的金屬粒子打入植物細胞或組織中,實現基因轉移。基因槍法的優點包括:無宿主限制,靶受體類型廣泛(具有潛在分生能力的細胞或組織都可),步驟簡單易操作,不需制作原生質體等。基因槍法的缺點是整合位點具有隨機性,拷貝數往往較多,基因不容易穩定表達(后代容易出現突變、外源基因丟失)等,且基因槍法較為昂貴。
PEG法:PEG法的原理是通過聚乙二醇改變受體細胞的細胞膜通透性,從而使外源DNA更容易進入原生質體。該方法不需要昂貴、特殊的設備,實驗結果比較穩定。原生質體是除去細胞壁的不完整細胞,是遺傳操作的好材料。PEG法可瞬間表達外源基因,也可獲得穩定表達的轉基因細胞系或者轉基因植株。
花粉管通道法:花粉管通道法的原理是利用植物受粉后,雌蕊柱頭上萌發形成花粉管通道,外源DNA液通過微量注射器進入花中。觀察后代的變異,篩選轉基因植物。該方法的特點是不需要經過組織再生,省去人工組培過程,并且,后代植株中無鑲嵌體的存在,但是轉化率低、重復性不高。
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