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農桿菌介導的植物遺傳轉化技術介紹

作者:banjian77 時間:2022-10-19 來源:互聯網

  植物遺傳轉化技術也稱植物轉基因技術,是應用DNA重組技術將外源基因通過生物、物理或化學等手段導入植物基因組,以獲得外源基因穩定遺傳和表達的植物遺傳改良的一門技術。目前*常用的轉基因方法是基因槍法和農桿菌法?;驑尫ǖ幕驹硎抢帽砻娓街型庠碊NA的金屬微粒在高壓裝置中加速后高速運動到受體細胞中,從而達到轉化DNA的目的。但是基因槍法與農桿菌介導法相比,存在著轉化率低、遺傳穩定性較差、外源DNA整合機理不清楚、得到的轉化體往往是嵌合體、轉入外源基因的沉默現象突出等缺點。

  優點

  農桿菌作為一種天然的植物基因轉化系統,其介導的轉化屬于純生物學的過程,與其它轉化方法相比具有明顯的優點,主要包括:(1)轉化頻率高;(2)可導入大片段的DNA,且導入植物細胞的片段確切;(3)導入基因拷貝數低,大多只有1-3個,表達效果好,能穩定遺傳,多數符合盂德爾遺傳規律。而且,從大量的報道可以發現,農桿菌的寄主范圍有很大的擴展,已經延伸到了原核生物、真菌甚至人類細胞等非植物領域。

  原理

  農桿菌是一種革蘭氏陰性細菌,它對寄主細胞的轉化是借助誘導瘤細胞(tumor-inducing, Ti)質粒將其中一段特定的DNA片斷轉入寄主細胞基因組的過程。在自然環境中,被轉移的DNA (T-DNA)攜帶了一套致瘤基因和冠癭堿代謝基因,它們在植物中的表達可引起被侵染組織產生腫瘤并合成冠癭堿作為細菌的氮源。利用分子克隆技術可以將T-DNA替換為目標基因,使農桿菌成為一個能有效將外源基因導入植物的天然工具。

  此外,有多種植物蛋白質也參與了農桿菌介導的基因轉化過程,主要作用于T-DNA胞內運輸、進入細胞核以及整合階段。因為農桿菌主要利用植物細胞內的生物過程(例如DNA和蛋白質運輸、靶蛋白水解和DNA修復)來轉化其受體,研究這些基本的植物細胞生物學機制有助于擴大農桿菌的受體范圍,同樣也可促進轉化過程和轉基因植物的產物控制。改善植物受體以提高較難轉化的植物物種的轉化效率是目前研究的主要方向之一。

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