化妝品眼刺激性檢測標準及方法介紹
作者：小強 時間：2022-10-19 來源：互聯網
化妝品眼刺激性怎么檢測?目前對于化妝品眼刺激性有對應的檢測方法標準依據。今天百檢網就給大家介紹一下化妝品眼刺激性的測定方法相關信息。
檢測方法標準依據：SN/T 3084.2-2014 進出口化妝品眼刺激性試驗 角膜細胞試驗方法
1 范圍
SN/T 3084 的本部分規定了化妝品眼刺激性角膜細胞試驗方法。
本部分適用于化妝品原料和成品眼刺激性體外篩選試驗。
本部分適用于部分化妝品使用的表面活性劑的篩選測試。
本部分可作為眼刺激性動物試驗的替代方法之一。可以結合其他眼刺激替代試驗，對眼刺激效應進行綜合評價。
本部分可作為其他領域眼刺激體外測試的參考方法。
2 規范性引用文件
下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其*新版本(包括所有的修改單)適用于本文件
SN/T 2285 化妝品體外替代試驗實驗室規范
3 術語和定義
下列術語和定義適用于本文件。
3.1 眼刺激性 eye irritation
眼球表面接觸受試樣品后產生的可逆性炎性變化。
3.2 SIRC細胞系 statens seruminstitut rabbit cornea cell line
來源于兔眼角膜組織的成纖維細胞系。
3.3 STE試驗 short time exposure test
采用SIRC細胞進行的短時間暴露試驗，本部分指5min暴露試驗。
4 原理
本試驗采用來源于眼刺激靶器官的SIRC細胞系，將樣本干預細胞5min，然后去除。采用CCK-8細胞毒性測試法( cell counting kit-8 cytotoxicity test)，使干預后的細胞與CCK-8試劑反應，活細胞線粒體中的脫氫酶會將CCK-8試劑還原成橙黃色的甲臢染料，活細胞越多，被還原成的染料越多，顏色深淺與細胞數目呈線性關系。通過測定波長450nm時的吸光度值，計算細胞的生存率，判斷樣品的眼刺激性。本部分為STE短時暴露試驗，適用于不同溶解性狀的樣本。
5 儀器與試劑耗材
5.1 儀器
5.1.1 Ⅱ級生物安全柜。
5.1.2 二氧化碳培養箱：溫度37℃±1℃，濕度90%±5%，5%±1%CO2濃度。
5.1.3 恒溫水浴箱：溫度37℃±1℃。
5.1.4 倒置顯微鏡。
5.1.5 酶標儀。
5.1.6 電子大平：0.1mg量程。
5.1.7 細胞計數儀或血球計數器。
5.1.8 離心機。
5.1.9 混懸儀。
5.1.10 真空吸液泵。
5.1.11 程序降溫儀。
5.1.12 液氮罐。
5.1.13 5μL~50μL，10μL~100μL，20μL~200μL量程排槍。
5.1.14 細胞凍存盒。
5.2 試劑耗材
5.2.1 MEM培養基( minimum essential medium)
5.2.2 胎牛血清(FBS)：56℃加熱滅30min。
5.2.3 0.25%胰酶/EDTA溶液(Trypsin/EDTA)：0.25%胰酶溶液與0.02 mol/L EDTA溶液1：1混均。
5.2.4 青霉素/鏈霉素雙抗：工作溶液青霉素(100U/mL鏈霉素(100μg/mL)。
5.2.5 MEM完全培養基：含10%FBS、100U/mL青霉素、100μg/mL霉素。
5.2.6 二甲基亞砜(DMSO)。
5.2.7 細胞凍存培養基：含20%FBS、10%DMSO的MEM培養基。
5.2.8 磷酸鹽緩沖液(PBS)。
5.2.9 礦物油：細胞培養級。
5.2.10 0.1%十二烷基硫酸鈉(SDS)：稱取0.01gSDS于10mL無菌試管中，加入PBS至10mL。
5.2.11 5%吐溫20(TWEEN20)：稱取0.5 g TWEEN20于10mL無菌試管中，加入PBS至10mL。
5.2.12 CCK-8試劑。
5.2.13 50mL無菌離心管。
5.2.14 無菌吸管(5mL，10mL)。
5.2.15 10mL無菌試管。
5.2.16 細胞培養瓶及培養板：25cm2、75cm2培養瓶：96孔平底細胞培養板。
………………
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