養殖水體中孔雀石綠殘留量怎么檢測?目前對于養殖水體中孔雀石綠殘留量有對應的檢測方法標準依據。今天百檢網就給大家介紹一下養殖水體中孔雀石綠殘留量的測定方法相關信息。

檢測方法標準依據：DB21/T 2288-2014 養殖水體中孔雀石綠殘留量的測定 液相色譜串聯質譜法

1 范圍

本標準規定了養殖水體中孔雀石綠殘留量的測定-液相色譜串聯質譜法的原理、試劑、儀器設備、測定步驟、結果計算、檢出限、回收率和精密度。

本標準適用于漁業生產養殖水體中孔雀石綠殘留量的測定。本方法的檢出限為0.05ug/L。

2 規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其*新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法

3 原理

樣品中的孔雀石綠用乙腈和二氯甲烷液液萃取，反相色譜柱分離，質譜檢測器檢測，內標法定量。

4 試劑

4.1 乙腈：色譜純。

4.2 二氯甲烷。

4.3 無水乙酸銨。

4.4 甲酸。

4.5 甲酸溶液[1+1000]：準確吸取1.00mL甲酸溶于1000mL水中，經0.22μm混合纖維素濾膜過濾。

4.6 乙酸銨緩沖溶液[5mol/L]：稱取0.385g無水乙酸銨溶解于1000mL水中，冰乙酸調pH到4.5。

4.7 乙腈-乙酸銨混合溶液(1+1)：500mL乙腈與500mL乙酸銨溶液(4.6)超聲混合5min。

4.8 鹽酸羥胺。

4.9 鹽酸羥胺溶液[0.25g/mL]：稱取25g鹽酸羥胺溶于100mL水中。

4.10 對-甲苯磺酸。

4.11 對-甲苯磺酸溶液[1.0mol/L]：稱取17.2g對-甲苯磺酸，用水溶解，并定容至100mL。

4.12 標準品：孔雀石綠(MG)、氘代孔雀石綠(D5-MG)，純度≥98%。

4.13 標準儲備溶液。

4.13.1 孔雀石綠標準儲備溶液[1.0mg/mL]：準確稱取10.0mg的孔雀石綠標準品，用乙腈配制成1.0mg/mL的標準儲備溶液，-18℃避光保存，保存期3個月。

4.13.2 氘代孔雀石綠標準儲備溶液[1.Omg/mL]：準確稱取10.00mg的氘代孔雀石綠標準品，用乙腈配制成1.0mg/mL的標準儲備溶液，-18℃避光保存，保存期3個月。

4.14 孔雀石綠標準工作溶液[l00ng/mL、10.0ng/mL]：準確吸取孔雀石綠標準儲備溶液(4.13.1)，用乙腈逐級稀釋配成100ng/mL和10.0ng/mL的工作溶液，-18℃避光保存，保存期7天。

4.15 氘代孔雀石綠標準工作溶液[l00ng/mL]：準確吸取氘代孔雀石綠標準儲備溶液(4.13.2)，用乙腈逐級稀釋配成100ng/mL的工作溶液，-18℃避光保存，保存期7天。

注：除非另作說明，本方法所用試劑均為分析純，試驗用水符合GB/T 6682 一級水指標。

5 儀器和設備

5.1 高效液相色譜-串聯質譜聯用儀。

5.2 電子天平：感量0.01mg。

5.3 旋轉蒸發儀。

5.4 旋渦振蕩器。

5.5 超聲波振蕩器。

6 測定步驟

6.1 樣品處理

6.1.1 吸取水樣50.00mL，置于250mL分液漏斗中。向分液漏斗中加入20.0μL氘代孔雀石綠標準工作溶液(4.15)、1.5mL鹽酸羥胺溶液(4.9)、2.5mL對-甲苯磺酸溶液(4.11)，振搖混勻。

6.1.2 加入10.0mL乙腈、25.0mL二氯甲烷，劇烈振搖3min，靜置分層10min，將下層溶液轉移至125mL雞心瓶中。

6.1.3 繼續向分液漏斗中加入10.0mL乙腈、25.0mL二氯甲烷，劇烈振搖3min，靜置分層10min，合并下層溶液于上述125mL雞心瓶中，于45℃±2℃水浴中減壓濃縮至近干。

6.1.4 向雞心瓶中加入1.00mL乙腈-乙酸銨混合溶液(4.7)，渦旋振蕩lmin、超聲振蕩lmin，樣液經0.22μm針孔式有機相濾膜過濾后供高效液相色譜-串聯質譜聯用儀測定。

6.2 空白試驗

準確量取50.00mL不含孔雀石綠的水樣，按樣品處理步驟進行。

6.3.1 色譜條件

6.3.1.1 色譜柱：C柱，100mm×3.0mm(內徑)，粒度1.8μm。

6.3.1.2 流動相：乙腈十甲酸水溶液(0.1%)=60+40(V/V)。

6.3.1.3 流速：0.25mL/min。

6.3.1.4 柱溫：35℃。

6.3.1.5 進樣量：10μL。

6.3.2 質譜條件

6.3.2.1 離子源：電噴霧ESI源，正離子模式。

6.3.2.2 掃描方式：多反應監測MRM。

6.3.2.3 霧化氣壓力：40psi。

6.3.2.4 霧化氣溫度：350℃。

6.3.2.5 霧化氣、干燥氣為高純氮氣，氣體流量：10L/min。

6.3.2.6 碰撞氣為高純氮氣，氣體壓力：0.15MPa。

6.3.2.7 監測離子對：孔雀石綠m/z 329/313、329/208;氘代孔雀石綠m/z 334/318。

6.4 標準曲線的配制

檢測前，吸取孔雀石綠標準工作溶液(4.14)、氘代孔雀石綠標準工作溶液[4.15]適量，用流動相配制成濃度分別為0.01ng/mL、0.05ng/mL、0.10ng/mL、0.50ng/mL、1.00ng/mL、2.00ng/mL、5.00ng/mL的混合標準系列工作溶液，每亳升該溶液含有氘代孔雀石綠2.0ng。將此混合標準系列工作溶液按6.3的儀器條件測定，孔雀石綠以氘代孔雀石綠為內標物，通過儀器工作站制定內標法標準曲線。

6.5 定性依據

在同樣測試條件下，陽性樣品保留時間與標準物質保留時間相對標準偏差在士5%以內，且檢測到的離子的相對豐度，用與*強離子(基峰)的強度百分比表示，應當與濃度相當的校正標準相對豐度一致。

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