作者:Lance 時間:2022-10-25 來源:互聯網
1范圍
本標準規定了化學品魚類急性毒性試驗的術語和定義、受試物信息、方法原理、試驗準備、試驗、質量控制、數據與報告
本標準適用于測試和評價化學品的魚類急性毒性.
2術語和定義
下列術語和定義適用于本文件.
2.1靜態試驗 static test以整個試驗過程中試驗介質不更換、不流動的方式進行的試驗。
2.2半靜態試驗 semi-static test以定期(如24 h)更換試驗介質的方式進行的試驗。
2.3旅水式試驗flow-through test以整個試驗過程中試驗介質自動、持續地被更換的方式進行的試驗。
2.4半數致死濃度median lethal concentration引起50%的受試魚死亡的受試物濃度,以LCso表示。
3受試物信息
受試物信息包括,a)水中溶解度;b)溶液中定量分析方法;c)結構式;d)純度
)水中和光中的穩定性;f)pK.值;
8)正辛醇-水分配系數(P.);h)蒸氣壓;
)快速生物降解結果。
4方法原理
魚類急性毒性試驗用于評價受試物對魚類可能產生的影響,以短期暴露效應表明受試物的危害性。
GB/T 27861-2011將魚暴露于不同濃度的受試物溶液,以96 h為試驗周期,在24 h.48 h、72 h和96 h時記錄魚的死亡率,分別確定50%試驗魚死亡時的受試物濃度,用LCGo表示。
5試驗準備
5.1 儀器設備
儀器設備至少包括:a)溶解氧測定儀;b)水硬度計;c)溫度控制儀;d)化學惰性材料制成的水族箱或水槽,規格一致,體積適宜;e)pHi.
5.2試驗生物選擇
選用一個或多個魚種,根據需要自行選擇。建議根據全年可得、易于飼養、方便試驗等原則,并結合相關的經濟、生物或生態因素等來確定魚種。試驗用魚應健康,無明顯的畸形.
推薦試驗用魚可參見附錄A中表A.1,表格中的魚種都為全年可得、易于飼養。可在養魚場或實驗室中疾病與寄生蟲控制的條件下進行馴化和飼養,使試驗魚保持健康,遺傳清晰。這些魚種在世界許多地方都可找到,若使用其他符合以上標準的魚種,試驗方法應作相應調整以提供合適的試驗條件。
5.3試驗魚的馴養
試驗魚用于試驗之前,應在實驗室至少暫養12d.臨試驗前,應在符合下列條件的環境中至少馴養7d:一水:與試驗用水相同;
-光照:每天12 h~16 h光照;
-溫度:與試驗魚種相適宜(參見附錄A中表A.1);溶解氧濃度:不小于80%空氣飽和值;
-喂養:每周3次或每天投食,至試驗開始前24 h為止。
馴養開始48 h后,記錄死亡率,并按下列標準處理:
--7d內,死亡率大于10%,舍棄整批魚;
-7 d內,死亡率在5%~10%之間,繼續馴養7d;
-7d內,死亡率小于5%,可用于試驗。
5.4 試驗用水
使用高質量的自然水或標準稀釋水(參見附錄B),也可以使用飲用水,必要時應除氯。水的總硬度
(以CaCO,計)為10 mg/L~250 mg/L,pH值為6.0~8.5,用于配制標準稀釋水的試劑應為分析純,去離子水或蒸餾水的電導率應小于或等于10pS/cm.
5.5試驗溶液
通過稀釋貯備液配制試驗溶液。低水溶性物質的貯備液可以通過超聲分散或其他適合的物理方法配制,必要時可使用對魚毒性低的有機溶劑、乳化劑或分散劑來助溶。使用這些物質時應加設助溶劑對照試驗,對照組助溶劑濃度應為試驗組使用助溶劑的*高濃度,并且不得超過100mg/L.
不需調節試驗溶液的pH值。如果加入受試物后試驗溶液的pH值有明顯變化,建議重新配制,調節受試物貯備液的pH值,使其接近加入受試物前稀釋水的pH值,用于調節pH值的物質不應使貯備液的濃度明顯改變,也不應與受試物發生化學反應或產生沉淀,*好使用HCI和NaOH來調節.
6試驗
6.1 暴露條件
暴露條件包括:
-持續時間:96 h;
-承載量:靜態和半靜態試驗系統試驗魚的*大承載量為1.0g/L,流水式試驗系統承載量可高一些
-光照;每天12h-16 h;
-溫度:與試驗魚種相適宜(參見附錄A中表A.1),保持恒定,變化范圍±2℃;
-溶解氧:不小于60%空氣飽和值,若不會導致受試物明顯損失時可進行驟氣;
-喂食:不進行;
-干擾:避免可能改變魚行為的干擾。
6.2 試驗魚數量
空白對照組與各試驗濃度組應每組至少7尾魚。
6.3試驗濃度設置
根據預試驗結果來選擇正式試驗合適的濃度范圍,至少應設置5個濃度組,并以幾何級數排布,公比應不大于2.2.
6.4 試驗對照組設置
每一系列設一個空白對照,如使用了助溶劑,應增設一個助溶劑對照.
6.5觀察
至少在24 h.48 h,72h和96h后檢查試驗魚的狀況。如果試驗魚沒有任何肉眼可見的運動,如魏的扇動,以及碰觸尾部后無反應,即可判斷該魚已死亡。觀察并記錄死魚數目后,將死魚從容器中移去。
*好在試驗開始后3h及6h時觀察各試驗組魚的狀況。記錄可見的試驗魚異常情況(如平衡能力喪失,游泳能力和呼吸功能減弱,顏色變淺等)
每天至少測定一次pH值、溶解氧和溫度。
6.6 限度試驗
應用本標準時,為證明LCso> 100 mg/L,可以進行濃度為100 mg/L(有效成分)的限度試驗。限度試驗組至少使用7尾魚,與對照組使用的魚數目相等。二項式理論表明:使用10尾魚,沒有1尾魚死亡,那么LCso>100 mg/L的概率為99.9%;使用7尾、8尾或9尾魚,沒有1尾魚死亡,那么LCso>
100 mg/L的概率至少為99%,如果試驗魚發生死亡,則應按本標準的試驗程序進行完整的試驗.若觀察到亞致死效應,應進行記錄.
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