1.范圍

本標準規定了化妝品中阿莫西林、氨芐西林、哌拉四林、青霉素G、青霉素V、苯唑四林、氯唑西林、萘夫西林和雙氯西林9種禁用青霉素類抗生素的液相色譜-串聯質譜測定方法的原理、試劑和材料、儀器設備、試驗步驟、結果計算、回收率與精密度,允許差等內容。

本標準適用于化妝品中阿莫西林、氨芐西林、哌拉西林,青霉素G、青霉素V、苯唑西林,氯唑西林、萘夫西林和雙氯西林9種禁用青霉素類抗生素的定量測定。

本標準方法的檢出限為10.0μg/kg，定量限為30.0μg/kg。

2.規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其*新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法

3.原理

采用堿性乙腈溶液提取試樣中的青霉素類藥物,待有機溶劑去除后定容,上液相色譜-串聯質譜儀測定,外標法定量。

4.試劑和材料

4.1 水:GB/T 6682規定的一級水。

4.2 乙腈:色譜純。

4.3 正己烷:色譜純。

4.4 乙酸:優級純。

4.5 氨水:分析純。

4.6 5%乙睛:準確量取50mL乙腈至1000mL容量瓶中,用水定容至刻度。

4.7 乙腈提取液;準確量取0.6mL氨水與100mL乙腈充分混合。

4.8 乙腈飽和的正己烷溶液:取100mL正己烷和50mL乙腈于250mL分液漏斗中,振搖1min,靜置分層后,棄掉乙腈。

4.9 0.1%乙酸:準確量取1mL乙酸(4.4)至1000mL容量瓶中,用水定容至刻度。

4.10 0.1%乙酸乙腈:準確量取1mL乙酸(4.4)至1000mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度。

4.11 標準物質:純度不小于95%。阿莫西林、氨芐西林、哌拉西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林和雙氯西林的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質量以及化學結構式參見附錄A表A.1。

4.12 混合標準工作溶液:準確稱取適量各標準物質(4.11)(精確至0.1mg),分別用5%乙睛溶液(4.6)溶解、定容,配制成濃度為10mg/L的標準儲備溶液(4℃冰箱保存,有效期1個月)。分別量取2.50mL9種青霉素的標準儲備溶液至500mL容量瓶中，用5%乙腈稀釋定容，配制成500μg/L的混合標準儲備溶液(4℃冰箱保存,有效期1個月)。準確移取適量混合標準儲備溶液，用5%乙腈溶液稀釋成濃度為10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L、250μg/L的混合標準工作溶液，臨用前現配。

4.13 孔徑0.22μm有機濾膜。

5.儀器設備

5.1 液相色譜-三重四級桿質譜聯用儀(LC-MS/MS):配電噴霧離子源(ESI)。

5.2 電子天平:感量0.1mg、0.01mg。

5.3 離心機:*大轉速不低于8000r/min。

5.4 超聲波清洗器。

5.5 渦旋混合器。

5.6 旋轉蒸發儀。

6.測定步驟

6.1 試樣處理

稱取試樣約0.5g(精確至0.1mg)于50mL具塞塑料離心管中，加入15mL乙腈提取提取液(4.7)，于渦旋混合器上使樣品分散，超聲提取10min后，以8000r/min離心5min，吸出所有上層清液于另一50mL具塞塑料離心管中，加入5mL乙腈飽和的正己烷，振蕩1min，棄掉正己烷。將提取液轉移至雞心瓶中，40℃水浴旋轉蒸發至近干，加入2mL水溶解殘渣，混勻。待測液經0.22μm濾膜過濾后，用液相色譜-串聯質譜儀測定。

6.2 測定條件

6.2.1 液相色譜參考條件

液相色譜參考條件如下：

a) 色譜柱：C18色譜柱，150mm×2.1mm(內徑),3.5μm或相當者;

b) 流動相：0.1%乙酸水溶液,B:0.%乙酸乙腈,梯度洗脫,梯度洗脫程序見表1;

c) 柱溫：30℃;

d) 進樣量:10μL。

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