HJ 1215-2021 水質(zhì) 浮游植物的測定 濾膜-顯微鏡計數(shù)法

1 適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定水中浮游植物的濾膜-顯微鏡計數(shù)法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于地表水中浮游植物的快速測定。

當(dāng)樣品大過濾體積為 1000 ml 時，方法檢出限為 40 cells/L。方法檢出限計算方法詳見附錄 A。

2 規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)引用了下列文件或其中的條款。凡是注明日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是未注日期的引用文件，其新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T 14581 水質(zhì) 湖泊和水庫采樣技術(shù)指導(dǎo)

HJ/T 91 地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

?HJ 494 水質(zhì) 采樣技術(shù)指導(dǎo)

3 術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

3.1

浮游植物 phytoplankton

在水中營浮游生活的微小藻類植物，通常浮游植物就是浮游藻類，包括原核的藍(lán)藻和其它各類真核藻類。

3.2

計數(shù)單位 counting unit

顯微鏡視野下選擇計數(shù)的小單元，如細(xì)胞。

3.3

浮游植物密度 density of phytoplankton

單位體積內(nèi)浮游植物的細(xì)胞數(shù)，cells/L。

3.4

顯微鏡計數(shù)視野 microscope counting field

顯微鏡視野中限定一定面積的區(qū)域，用來定量計數(shù)浮游植物。

4 方法原理

樣品通過一定孔徑的濾膜，群體、絲狀體及單細(xì)胞浮游植物截留在濾膜上，濾膜經(jīng)透明處理后在顯微鏡下鏡檢。

5 試劑和材料

除非另有說明，分析時均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純試劑，實驗用水為新制備的去離子水或蒸餾水。

5.1 碘（I2）。

5.2 碘化鉀（KI）。

5.3 甲醛溶液：w＝37%～40%。

5.4 魯哥氏碘液：

稱取 60 g 碘化鉀（5.2）溶解在 100 ml 水中，再加入 40 g 碘（5.1），充分?jǐn)嚢枋蛊渫耆芙猓铀ㄈ葜?1000 ml，轉(zhuǎn)移至棕色磨口玻璃瓶，室溫避光保存。

5.5 顯微鏡浸沒油：nD23=1.515 或nE23=1.518，配透明玻璃滴棒。

5.6 濾膜：混合纖維素酯膜，直徑 25 mm，孔徑 0.45 μm～3 μm。

注：每批次濾膜應(yīng)進(jìn)行水化測試和油透明測試，滿足可水化和可透明要求后方可使用。將 1 張未使用的濾膜放入盛水的燒杯中，若濾膜被水完全浸潤，則濾膜可水化。取 1 張未使用的濾膜，置于滴有顯微鏡浸沒油的載玻片上， 若濾膜被浸沒油完全浸潤，則濾膜可透明。

6 儀器和設(shè)備

6.1 25 號浮游生物網(wǎng)：網(wǎng)孔直徑 0.064 mm，網(wǎng)呈圓錐形，網(wǎng)口套在銅環(huán)上，網(wǎng)底端有出水開關(guān)活塞。

6.2 定性采樣瓶：30 ml～100 ml 廣口聚乙烯瓶。

6.3 采水器：不銹鋼或有機(jī)玻璃材質(zhì)，圓柱形。容量和深度規(guī)格要滿足采樣要求。

6.4 定量采樣瓶：1 L～2 L 廣口聚乙烯瓶。

6.5 冷藏箱。

6.6 真空抽濾裝置：包括漏斗（直徑 25 mm，容積 200 ml）、多孔聚酯濾膜支撐板、收集瓶、真空泵（相對真空度≤－17 kPa，可調(diào)）。

6.7 載玻片：25 mm×76 mm。

注：載玻片和蓋玻片使用前應(yīng)用濃鹽酸和乙醇浸泡。若條件允許，選擇可直接使用的載玻片或蓋玻片。

6.8 蓋玻片：25 mm×25 mm。

6.9 無齒組織鑷子。

6.10 載玻片晾片板：適配同規(guī)格載玻片。

6.11 烘箱：70 ℃±2 ℃，溫度可調(diào)。

6.12 正置生物顯微鏡或倒置生物顯微鏡：物鏡 4×、10×、20×、40×；目鏡 10×或 15×。

6.13 載物臺測微計：又稱鏡臺測微計，1 mm/100 DIV，分劃值為 0.01 mm。

注：DIV 指等分格，1 mm/100 DIV 即 1 mm 等分成 100 格。

6.14 惠普爾目鏡分劃板（Whipple grid）：邊長為 7 mm～10 mm 的正方形大格，劃分為 100 個相同的正方形中格，位于中央的 1 個中格進(jìn)一步劃分為 25 個相同的正方形小格。

注：不具備惠普爾目鏡分劃板時，亦可使用同規(guī)格的網(wǎng)格型目鏡分劃板（即中央的中格未細(xì)分為 25 小格的網(wǎng)格型目鏡分劃板）。

6.15 計數(shù)器。

6.16 一般實驗室常用設(shè)備。

7 樣品

7.1 樣品采集

7.1.1 定性樣品

點位布設(shè)及采樣頻次按照GB/T 14581、HJ/T 91 和HJ 494 的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

使用 25 號浮游生物網(wǎng)（6.1）采集定性樣品。關(guān)閉浮游生物網(wǎng)底端出水活塞開關(guān)，在水面表層至0.5 m 水深處以 20 cm/s～30 cm/s 的速度做“∞”形往復(fù)，緩慢拖動約 1 min～3 min，待網(wǎng)中明顯有浮游植物進(jìn)入，將浮游生物網(wǎng)（6.1）提出水面，網(wǎng)內(nèi)水自然通過網(wǎng)孔濾出，待底部剩少許水樣（5 ml～ 10 ml）時，將底端出口移入定性采樣瓶（6.2）中，打開底端活塞開關(guān)收集定性樣品。采集分層樣品時，用 25 號浮游生物網(wǎng)（6.1）過濾特定水層樣品，其他步驟同采集表層樣品。定性樣品采集完成后及時將浮游生物網(wǎng)清洗干凈。樣品采集后放入冷藏箱（6.5）冷藏避光運輸。

如有定性樣品采集技術(shù)規(guī)范，按技術(shù)規(guī)范有關(guān)要求執(zhí)行。

7.1.2 定量樣品

按照GB/T 14581、HJ/T 91 和 HJ 494 的相關(guān)規(guī)定采集定量樣品。

使用采水器（6.3）采集 1 L～2 L 樣品至定量采樣瓶（6.4）中。若水體透明度較高，浮游植物數(shù)量較少時，應(yīng)酌情增加采樣體積。定量樣品采集完成后，定量采樣瓶（6.4）不應(yīng)裝滿，以便搖勻。

注 1：有些浮游植物（如藍(lán)藻）常上浮在水面或成片、條帶分布，可在此水華密集區(qū)域采樣作為峰值參考。注 2：定量樣品采集應(yīng)在定性樣品采集之前。應(yīng)保持固定時間段采樣，以便結(jié)果之間可相互比較。

7.2 樣品保存

7.2.1 定性樣品

定性樣品采集后應(yīng)立即加入魯哥氏碘液（5.4）固定，用量為水樣體積的 1.0%～1.5%。鏡檢活體樣品不加魯哥氏碘液（5.4）固定。定性樣品在室溫避光條件下可保存 3 周；1 ℃～5 ℃冷藏避光條件下可保存 12 個月。活體樣品 4 ℃～10 ℃冷藏避光條件下可保存 36 h。

7.2.2 定量樣品

定量樣品采集后立即加入魯哥氏碘液（5.4）固定，用量為水樣體積的 1.0%～1.5%。也可將魯哥氏碘液（5.4）提前加入定量采樣瓶（6.4）中帶至現(xiàn)場使用。定量樣品在室溫避光條件下可保存 3 周；1 ℃～5 ℃冷藏避光條件下可保存 12 個月。

樣品在保存過程中，應(yīng)每周檢查魯哥氏碘液（5.4）的氧化程度，若樣品顏色變淺，應(yīng)向樣品中補(bǔ)加適量的魯哥氏碘液（5.4），直到樣品的顏色恢復(fù)為黃褐色。

注：若樣品需長期保存，應(yīng)加入甲醛溶液（5.3），用量為水樣體積的4%。

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