檢測(cè)及試驗(yàn)方法

　　標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

　　準(zhǔn)確稱取各紫外線吸收劑標(biāo)準(zhǔn)品50mg(精確至0. 1mg)于50mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻，即得1g／L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，保存于4℃條件下；分別準(zhǔn)確量取1mL各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至20mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成50mg／L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，再用甲醇逐級(jí)稀釋成20、10、5、2、1、0. 5、0. 2mg／L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

　　樣品前處理

　　對(duì)于除唇膏外易于分散的試樣：稱取0. 5g(精確至0. 001g)試樣于25mL具塞比色管中，向比色管中加入4mL四氫呋喃(含2g／L氫氧化銨)，渦旋振蕩混勻，再加入80%(v／v)甲醇水溶液定容至10mL，渦旋混勻，然后超聲提取10min。取部分提取溶液轉(zhuǎn)移至10mL具塞塑料離心管中，以10 000r／min離心10min，取2mL上清液經(jīng)氮吹儀吹掃近干后，用2mL甲醇重新溶解，經(jīng)0. 45μm微孔濾膜過濾后進(jìn)行測(cè)定。

　　對(duì)于唇膏等不易分散的蠟質(zhì)試樣：加入4mL四氫呋喃(含2g／L氫氧化銨)，渦旋振蕩，如仍不能使試樣完全分散，可采用超聲振蕩加熱(50℃)的方式使試樣分散完全，然后向比色管中加入80%(v／v)甲醇水溶液，定容至10mL，后續(xù)步驟與其他樣品相同。

　　液相色譜條件

　　色譜柱：WatersXTerraMSC1(8 250mm×4. 6mm，5μm)；流動(dòng)相：A相為水(含0. 1%(v／v)甲酸)，B相為甲醇(含0. 1%(v／v)甲酸)；流速：1mL／min；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μL；梯度洗脫程序：0~5min，55%A~25%A；5~8min，25%A~22%A；8~10min，22%A；10 ~ 20min，22%A~ 10%A；20 ~ 21min，10%A~ 5%A；21 ~ 23min，5%A；23 ~ 24min，5%A~55%A；24~28min，55%A。檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm和311nm。

　　樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

　　本實(shí)驗(yàn)采用不同體積分?jǐn)?shù)(50%、60%、70%、80%、90%)的甲醇水溶液對(duì)空白加標(biāo)試樣中的目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行提取。結(jié)果表明，除唇膏等蠟質(zhì)試樣外，其他基質(zhì)類型樣品在高甲醇含量的水溶液提取條件下，仍有部分目標(biāo)物質(zhì)的提取效率不高，而且唇膏等蠟基質(zhì)試樣用甲醇也無法分散完全，從而導(dǎo)致目標(biāo)物質(zhì)回收率較低。針對(duì)該問題，本實(shí)驗(yàn)在試樣中**加入四氫呋喃分散樣品，然后加入80%(v／v)甲醇水溶液進(jìn)行提取的方法進(jìn)行樣品中目標(biāo)物質(zhì)的提取。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，除唇膏類樣品外，其他基質(zhì)類型化妝品試樣在4mL四氫呋喃及6mL80%(v／v)甲醇水溶液提取條件下所有目標(biāo)物質(zhì)均有較高的回收率。而對(duì)于某些唇膏等蠟基質(zhì)類型樣品，加入四氫呋喃后仍不能使其分散完全，因此本實(shí)驗(yàn)采用振蕩加熱至50℃的方式使唇膏等基質(zhì)分散完全，結(jié)果顯示，此條件下試樣分散效果較好，目標(biāo)物質(zhì)的回收率達(dá)到滿意的效果。

　　當(dāng)降低空白加標(biāo)水平至0. 1%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))以下時(shí)，除2-苯基苯并咪唑-5-磺酸回收率較低外，其他目標(biāo)物質(zhì)的回收率均達(dá)到80%以上。根據(jù)2-苯基苯并咪唑-5-磺酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)式，其帶有磺酸基，在中性條件下為解離狀態(tài)，離子狀態(tài)使得其增加了在水相中的溶解度，從而導(dǎo)致其回收率偏低。因此，在提取溶劑中加入流動(dòng)相中常添加的酸性改性劑甲酸來抑制2-苯基苯并咪唑-5-磺酸中磺酸基團(tuán)的解離。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在該物質(zhì)含量較低時(shí)，可以顯著提高目標(biāo)物質(zhì)回收率；但在高濃度時(shí)，回收率仍偏低。考慮到該物質(zhì)在氨化甲醇中有良好的溶解度，因此本實(shí)驗(yàn)又考察了在四氫呋喃中添加不同濃度的氫氧化銨條件下各物質(zhì)的回收率效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，添加2g／L氫氧化銨可使得2-苯基苯并咪唑-5-磺酸的回收率明顯提高，而且其他物質(zhì)的回收率均不受影響。因此，*終確定采用4mL含2g／L氫氧化銨的四氫呋喃溶液預(yù)處理試樣，然后加入6mL80%甲醇水溶液進(jìn)行提取的前處理?xiàng)l件。

　　液相色譜條件的優(yōu)化

　　1.色譜柱的選擇

　　色譜柱的種類對(duì)分析結(jié)果有至關(guān)重要的影響，C18柱和苯基柱是實(shí)驗(yàn)室常用的反相色譜柱。因采用不同的鍵合技術(shù)和硅羥基封端基團(tuán)的不同，雖同為C18填料，但其選擇性存在區(qū)別。本實(shí)驗(yàn)中選擇了WatersXTerraC18、AgilentZorbaxSB-Phenyl、大連依利特公司的KromasilC18、AgilentZorbaxSBC18 4種不同品牌、選擇分離性存在差異的色譜柱(規(guī)格均為250mm×4. 6mm，5μm)分別進(jìn)行梯度洗脫條件優(yōu)化。結(jié)果表明，二苯酮-1、二苯酮-8和二苯甲酮在AgilentZorbaxSB-Phenyl和KromasilC18色譜柱上難以分離；而AgilentZorbaxSBC18對(duì)水楊酸乙基己酯和胡莫柳酯的色譜分離存在難度；在WatersXTerraC18柱上經(jīng)梯度洗脫條件的優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)了15種紫外線吸收劑的全部基線分離。

　　2.流動(dòng)相的選擇

　　實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，異丙醇由于黏度較高，容易引起色譜系統(tǒng)的壓力上升，造成基線不穩(wěn)；而四氫呋喃作為一種常見的環(huán)醚，易被氧化，對(duì)PEEK管路造成損壞，且毒性較強(qiáng)。因此，本研究考慮采用常規(guī)的甲醇或乙腈和水添加一定濃度的酸性改性劑作為流動(dòng)相，以期實(shí)現(xiàn)15種目標(biāo)物質(zhì)的分離。

　　采用乙腈和水為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫時(shí)，由于乙腈的洗脫能力較強(qiáng)，實(shí)現(xiàn)基線分離較為困難；以甲醇和水為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫時(shí)，洗脫效果明顯好轉(zhuǎn)，通過梯度條件的優(yōu)化，基本實(shí)現(xiàn)全部目標(biāo)物的分離，但2-苯基苯并咪唑-5-磺酸的色譜峰拖尾嚴(yán)重。為了改善目標(biāo)物的色譜峰形，在流動(dòng)相中分別添加0. 1%甲酸，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2-苯基苯并咪唑-5-磺酸的色譜峰形明顯較未添加酸性改性劑時(shí)對(duì)稱，且明顯改善了各物質(zhì)間的分離度。15種紫外線吸收劑的色譜分離譜圖見圖1。