作者:百檢 時間:2022-11-28 來源:互聯網
溶液配制
流動相:0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(pH 3),準確稱取磷酸二氫鉀固體13.619 4 g,用水溶解后過0.45μm濾膜,用水定容至2 L,然后滴加磷酸調節pH值為3。
提取液:稱取30 g偏磷酸,用水溶解并稀釋至1 000 mL。
維生素C標準儲備液:精確稱取0.010 0 g維生素C標準品,用3%偏磷酸溶液溶解,配制成1mg/mL的標準儲備液。4℃避光保存,現用現配。
樣品處理
1.果汁飲料
稱取試樣2 g于50 mL棕色容量瓶中,用3%偏磷酸溶液定容至刻度,混勻,用0.22μm水系濾膜過濾,待測定。
2.大米、果凍、果泥、含乳飲料
稱取試樣5 g,加入30 mL 3%偏磷酸溶液,超聲15 min且超聲過程中加入冰塊控制水浴溫度在10~20℃之間,以4 000 r/min離心10 min。用0.22μm水系濾膜過濾后待測。
3.奶粉
稱取試樣2 g,加入20 mL 45~50℃水,渦旋混勻1 min,超聲15 min且超聲過程中需要加入冰塊控制水浴溫度在10~20℃之間。用5 mol/L鹽酸溶液調節pH至1.90±0.5,放置2 min,再用5mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至4.70±0.5,以4 000r/min離心10 min,用0.22μm水系濾膜過濾后待測。上述樣品處理驟均在避光條件下進行。
維生素C的穩定性試驗
維生素C是*不穩定的水溶性維生素,對光和溫度都非常敏感,堿性和中性環境中穩定性較差,且易被氧化。用不同溶劑(1%草酸、0.01 mol/L鹽酸、3%偏磷酸、0.01%乙酸、水、0.1%三氟乙酸、0.1mol/L KH2PO4、10 mmol/L乙酸銨和甲醇)分別配制100μg/mL標準溶液,4℃冰箱避光儲存。測試不同溶劑不同時間段維生素C的峰面積并進行比較,結果表明,維生素C在酸性環境中抗氧化能力較好,且采用3%偏磷酸溶劑配制的維生素C標準儲備液在10 h內基本不分解,可用于定量分析,10 h后開始出現少量分解,到12 h時分解22%。因此用3%偏磷酸配制的儲備溶液在10 h之內能夠滿足定量分析的要求。
維生素C提取條件優化
1.提取溶劑
大米、果泥、果凍和含乳飲料:維生素C具有較強的還原性,易受空氣、光、熱等因素影響,但在酸性條件下穩定。實驗選取了0.1%鹽酸、0.1%草酸、水、3%偏磷酸、0.01 mol/L鹽酸–甲醇(20∶80)、甲醇–水–磷酸(100∶400∶0.5)、0.1%磷酸、0.01%三氯乙酸–甲醇(50∶50)、4%三氯乙酸、3%偏磷酸–乙酸(50∶50)作為提取劑做添加回收試驗,結果發現,用3%偏磷酸作為提取劑回收率高且沉淀完全,且用3%偏磷酸配制的維生素C儲備溶液在10 h之內能夠穩定存在。因此實驗選取3%偏磷酸作為提取溶劑。
奶粉:因奶粉含有蛋白質、脂肪、維生素、多糖等復雜成分使得前處理方法比其它基質有較大難度。尤其奶粉中含有大量的蛋白質及脂肪等大分子兩性物質,在測定過程中容易形成泡沫、渾濁或出現沉淀而無法進行測定。實驗嘗試加入乙腈、乙酸鋅–亞鐵氰化鉀、乙醇、三氯甲烷、三氯乙酸沉淀蛋白,發現回收率偏低且沉淀不完全;利用固相萃取法進行樣品前處理步驟繁瑣,且回收率偏低。實驗發現:利用等電位法沉淀蛋白質,不僅可以使蛋白質沉淀完全且回收率高。考慮到維生素C在酸性環境中相對穩定,因此在前處理過程中既要保證蛋白質沉淀完全,又要使樣品溶液pH值小于7。實驗參考GB5413.14–2012,并根據維生素C的性質進行了相應調整,試驗發現:當pH值為1.9±0.5和4.7±0.5時沉淀效果較好,提取液澄清,且大分子物質沉淀完全,維生素C的平均回收率在90.8%~106.5%之間,相對標準偏差在0.21%~3.72%之間。
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